论文部分内容阅读
摘 要：为了解山东省肉仔鸡“肺水肿”流行病学情况，本研究采用临床症状观察与实验室诊断相结合的方法对山东各地36家肉鸡养殖场共95份病例进行了检测。结果表明，检测的36个规模化鸡场63.9%存在“肺水肿”感染;检出阳性病例53份，总感染率为55.8%;“肺水肿”感染地区差异不大，冬春季节多发，25～32日龄为发病高峰。结果提示，山东省大部分肉鸡养殖场中存在“肺水肿”感染，应采取相应的防治措施对该病进行控制。
关键词：肉仔鸡;肺水肿;流行病学调查;防治
中图分类号：S858.31 文献标识码：A 文章编号：1673-1085（2015）03-0017-03
肉仔鸡“肺水肿”是近几年在肉鸡群中流行的一种呼吸道疾病。发病鸡体温升高、食欲减退、流泪、呼吸困难。剖检变化表现为肺脏水肿、出血，发病稍长的肝脏、肺脏表面有黄白色纤维蛋白渗出。目前已证实引起肉仔鸡肺水肿的原因为H9N2禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）与大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）混合感染所致[1]。该病发病率较高，给肉鸡饲养场造成巨大的经济损失。为了解山东省肉仔鸡“肺水肿”的发病情况和流行规律，分析流行因素及存在的问题，为相关防治措施的制定提供基础数据及科学依据，同时应用研究结果指导肉鸡养殖场（户）采取针对性防疫方法与措施，减少其经济损失，本研究对山东省潍坊、淄博、青岛等地区肉仔鸡“肺水肿”进行了流行病学调查，同时制定了相应的防治措施。
1 材料和方法
1.1 样品采集 2012年7月～2014年6月从山东各地的36家肉鸡养殖场收集95份疑似肉仔鸡“肺水肿”病料，并了解记录发病鸡群所在地区、日龄、发病季节、免疫方式和管理等情况。
1.2 菌株和毒株 大肠杆菌（Escherichia coli）标准菌株ATCC25922购自国家兽医微生物菌种保藏中心;禽流感H9亚型灭活疫苗（A/chicken/Shandong/6/96株）购自哈尔滨维科生物技术开发公司。
1.3 主要试剂 普通营养琼脂、麦康凯琼脂、细菌微量生化鉴定管购自北京陆桥技术有限责任公司;TRIzol reagent购于Invitrogen公司;RT-PCR试剂盒购自北京天恩泽基因有限公司。其他试剂均为国产分析纯。
1.4 药敏试纸 红霉素、环丙沙星、青霉素等15种药敏试纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.5 大肠杆菌的检测 将采集的肺脏病料，无菌条件下在营养琼脂、麦康凯琼脂上分别划线分离，37℃培养18～24h，观察细菌的生长情况。根据细菌分离结果，将分离菌株的纯培养物分别作靛基质试验、甲基红试验、VP试验、枸橼酸盐利用试验，逐一鉴定筛选[2]。用大肠杆菌参考菌株ATCC25922 作对照。
1.6 H9N2禽流感病毒的检测 利用RT-PCR方法检测样品病毒RNA，针对H9N2禽流感病毒HA、NA基因设计引物，具体反应体系、反应程序参照文献[1]进行。反应结束后，取PCR产物电泳检测。以禽流感H9亚型灭活疫苗（A/chicken/Shandong/6/96株）作为阳性对照。
1.7 药敏试验 以接种环挑取适量大肠细菌培养物，在营养琼脂平板上密集均匀划线。用无菌镊子夹取各种抗菌药物纸片贴在培养基表面。倒置于37℃温箱培养24h后观察结果并测量抑菌圈大小。判定标准：抑菌圈直径大于15mm为高度敏感;抑菌圈直径在10～15mm之间为中度敏感;抑菌圈直径小于10mm为耐药[3]。
2 结果
2.1 病原检出结果 对95份病料进行了大肠杆菌和H9N2禽流感病毒的检测，检出大肠杆菌60份，H9N2禽流感病毒56份，大肠杆菌和H9N2禽流感病毒共感染的53份，阳性率为55.8%，见表1。
■
2.2 山东部分地区“肺水肿”总体感染状况 表2数据显示，36个肉鸡场63.9%（23/36）存在“肺水肿”，95份样品的总体阳性率为55.8%（53/95），不同地区的总体阳性率差异不显著，鲁东地区集约化养殖程度较高，阳性率略低于其他地区，见表2。
■
2.3 不同日龄“肺水肿”感染情况 调查结果发现，在感染“肺水肿”的53份病例中，25～32日龄的肉鸡感染“肺水肿”的比率最高，为39.6%;其次为33～40日龄肉仔鸡，感染率为26.4%;而8日龄以下的仔鸡感染率最低，仅为1.9%，见表3。
■
2.4 不同季节“肺水肿”感染情况 由表4可以看出，在感染“肺水肿”的53份病例中，1～3月份和11～12月份是该病的高发期，其中2月份“肺水肿”的感染率最高，为17.0%，见表4。
■
2.5 药敏试验结果 试验结果显示，60株大肠杆菌分离株对15种药物均出现不同程度的耐药性，平均耐药率为61.7%，且多重耐药现象比较普遍，81.7%以上的分离菌株对7种以上抗生素具有耐药作用，这说明山东地区肉鸡大肠杆菌的耐药性相当严重。其中对头孢哌酮、阿米卡星、大观霉素敏感度较高，高敏以上菌株占51.7%～70%，耐药率为5%～10%;对左氟沙星、氧氟沙星、卡那霉素敏感度次之，中敏以上菌株占53.3%～65%，耐药率为35%～46.7%;对多粘菌素、头孢曲松、妥布霉素、诺氟沙星、头孢噻吩、青霉素、环丙沙星、氨苄西林、头孢唑啉敏感度最低，高敏以上菌株低于3.3%，耐药率高于53.3%，见表5。 ■
3 肉仔鸡“肺水肿”的防治措施
3.1 加强饲养管理 改善环境卫生，注意鸡舍通风换气，可根据情况进行间歇式通风;注意舍内的空气湿度，可以通过喷雾保持空气湿润，降低空气中有害物质;给鸡群提供全价优质饲料，保证充足的维生素、矿物质和电解质，增强机体抵抗力，提高呼吸道粘膜免疫功能，防止继发感染的发生。
3.2 建立生物安全体系 健全各种消毒制度和设施，进行带鸡消毒，对用具、食槽、水槽、接触病鸡的人员及污染场地严格消毒，鸡粪要定期做无害化处理，病死鸡做深埋或焚烧处理。同时要做好切断传染源的工作，严格控制外来人员进入鸡舍，对于进出鸡场的车辆要彻底消毒。
3.3 做好免疫接种 与其他病毒性疾病一样，接种疫苗是预防H9N2亚型禽流感发生与传播的最有效手段之一。在肉鸡10日龄左右给予禽流感油乳苗皮下注射0.3ml[4]，并且定期对鸡群进行实验室禽流感的抗体检测，使鸡群保持较高的抗体水平。
3.4 科学用药 对于该病的防治，关键在于控制其继发感染大肠杆菌。在发病早期，可以投服一些抗病毒药物，如黄芪多糖，并以疏通呼吸道、平喘、止咳、化痰、增强机体抵抗力为主;发病中期以防止支气管阻塞和继发感染为主，可通过药敏试验选择敏感药物如头孢哌酮、阿米卡星等对症治疗。用药时遵循以下原则：正确诊断，对症下药;根据抗菌药自身特性和疾病特点来选择给药途径;正确掌握用量和疗程;最好能依据药敏试验结果来选择药物;尽量避免使用影响免疫反应和生产性能的药物等[5]。
4 讨论
本次调查结果表明，山东省肉仔鸡“肺水肿”的总体感染率为63.9%，在调查的36个肉鸡养殖场中有23个养殖场检测结果为阳性。该病发病率有一定的日龄和季节差异，25～32日龄肉鸡患该病的几率最高，约为39.6%，而1～8日龄以下肉鸡发病率最低，仅为1.9%，这可能与雏鸡体内母源抗体水平较高有关。冬春季节发病率高，可能由于冬春季节气候多变，肉鸡养殖以保温为主，饲养密度过高，通风不良，舍内空气含尘量大，氨气、硫化氢等有害气体浓度过高，这些不利环境因素损伤上呼吸道粘膜，使机体对H9亚型AIV的感染更为敏感，然后继发感染大肠杆菌。
使用抗菌药物是治疗大肠杆菌病的主要方法，但是在治疗大肠杆菌病的同时，产生了各种耐药菌株。刘聚祥等[6]用氟苯尼考、氧氟沙星等12种抗菌药物对从东北、河北、山东、华东等地分离的21株鸡致病性大肠杆菌进行药敏检测，结果表明：21株菌均为多重耐药菌株，说明鸡致病性大肠杆菌的耐药性日益增强，耐药谱越来越广。该研究通过药敏试验对临床上常用的15种药物进行了筛选，亦发现分离菌株均出现不同程度的耐药性，且多重耐药现象比较普遍，说明山东地区肉鸡大肠杆菌的耐药性相当严重。其中对头孢哌酮、阿米卡星、大观霉素敏感度较高，高敏以上菌株占51.7%～70%，耐药率为5%～10%，为治疗大肠杆菌病的首选药物。
通过对山东省肉仔鸡“肺水肿”病进行流行病学调查，发现“肺水肿”的发病率与肉鸡的饲养管理水平、日龄、季节、免疫等都有关，因此在预防“肺水肿”疾病中要考虑各种影响其发病的因素，采取综合的防治措施。日常要实行科学的饲养管理，建立良好的生物安全体系，健全各种消毒制度和设施;要完善并强化免疫制度，搞好定期预防接种;通过药敏试验筛选敏感有效药物，进行对症治疗，以防止继发感染的发生。
参考文献：
[1] 王光锋，李舫，李汝春，等.肉仔鸡“肺水肿”病原的分离与鉴定[J].中国家禽，2014，36（19）：53-56.
[2] 中华人民共和国卫生部.食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数[S].北京，2012.
[3] 蔡宝祥.动物传染病诊断学[M ].4版. 北京：中国农业出版社，2001：46-47.
[4] 沙明利，任晚霞，齐洪艳.浅谈鸡呼吸道疾病的病因及防治[J].家禽科学，2010，4：28-29.
[5] 王雪玲.鸡大肠杆菌病防治研究进展[J].河南畜牧兽医，2012，33（8）：5-6.
[6] 刘聚祥，李宏娟，李占雷，等.我国部分地区鸡致病性大肠杆菌的耐药性检测与分析[J].河北农业大学学报，2007，30（5）：94-98.
关键词：肉仔鸡;肺水肿;流行病学调查;防治
中图分类号：S858.31 文献标识码：A 文章编号：1673-1085（2015）03-0017-03
肉仔鸡“肺水肿”是近几年在肉鸡群中流行的一种呼吸道疾病。发病鸡体温升高、食欲减退、流泪、呼吸困难。剖检变化表现为肺脏水肿、出血，发病稍长的肝脏、肺脏表面有黄白色纤维蛋白渗出。目前已证实引起肉仔鸡肺水肿的原因为H9N2禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）与大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）混合感染所致[1]。该病发病率较高，给肉鸡饲养场造成巨大的经济损失。为了解山东省肉仔鸡“肺水肿”的发病情况和流行规律，分析流行因素及存在的问题，为相关防治措施的制定提供基础数据及科学依据，同时应用研究结果指导肉鸡养殖场（户）采取针对性防疫方法与措施，减少其经济损失，本研究对山东省潍坊、淄博、青岛等地区肉仔鸡“肺水肿”进行了流行病学调查，同时制定了相应的防治措施。
1 材料和方法
1.1 样品采集 2012年7月～2014年6月从山东各地的36家肉鸡养殖场收集95份疑似肉仔鸡“肺水肿”病料，并了解记录发病鸡群所在地区、日龄、发病季节、免疫方式和管理等情况。
1.2 菌株和毒株 大肠杆菌（Escherichia coli）标准菌株ATCC25922购自国家兽医微生物菌种保藏中心;禽流感H9亚型灭活疫苗（A/chicken/Shandong/6/96株）购自哈尔滨维科生物技术开发公司。
1.3 主要试剂 普通营养琼脂、麦康凯琼脂、细菌微量生化鉴定管购自北京陆桥技术有限责任公司;TRIzol reagent购于Invitrogen公司;RT-PCR试剂盒购自北京天恩泽基因有限公司。其他试剂均为国产分析纯。
1.4 药敏试纸 红霉素、环丙沙星、青霉素等15种药敏试纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.5 大肠杆菌的检测 将采集的肺脏病料，无菌条件下在营养琼脂、麦康凯琼脂上分别划线分离，37℃培养18～24h，观察细菌的生长情况。根据细菌分离结果，将分离菌株的纯培养物分别作靛基质试验、甲基红试验、VP试验、枸橼酸盐利用试验，逐一鉴定筛选[2]。用大肠杆菌参考菌株ATCC25922 作对照。
1.6 H9N2禽流感病毒的检测 利用RT-PCR方法检测样品病毒RNA，针对H9N2禽流感病毒HA、NA基因设计引物，具体反应体系、反应程序参照文献[1]进行。反应结束后，取PCR产物电泳检测。以禽流感H9亚型灭活疫苗（A/chicken/Shandong/6/96株）作为阳性对照。
1.7 药敏试验 以接种环挑取适量大肠细菌培养物，在营养琼脂平板上密集均匀划线。用无菌镊子夹取各种抗菌药物纸片贴在培养基表面。倒置于37℃温箱培养24h后观察结果并测量抑菌圈大小。判定标准：抑菌圈直径大于15mm为高度敏感;抑菌圈直径在10～15mm之间为中度敏感;抑菌圈直径小于10mm为耐药[3]。
2 结果
2.1 病原检出结果 对95份病料进行了大肠杆菌和H9N2禽流感病毒的检测，检出大肠杆菌60份，H9N2禽流感病毒56份，大肠杆菌和H9N2禽流感病毒共感染的53份，阳性率为55.8%，见表1。
■
2.2 山东部分地区“肺水肿”总体感染状况 表2数据显示，36个肉鸡场63.9%（23/36）存在“肺水肿”，95份样品的总体阳性率为55.8%（53/95），不同地区的总体阳性率差异不显著，鲁东地区集约化养殖程度较高，阳性率略低于其他地区，见表2。
■
2.3 不同日龄“肺水肿”感染情况 调查结果发现，在感染“肺水肿”的53份病例中，25～32日龄的肉鸡感染“肺水肿”的比率最高，为39.6%;其次为33～40日龄肉仔鸡，感染率为26.4%;而8日龄以下的仔鸡感染率最低，仅为1.9%，见表3。
■
2.4 不同季节“肺水肿”感染情况 由表4可以看出，在感染“肺水肿”的53份病例中，1～3月份和11～12月份是该病的高发期，其中2月份“肺水肿”的感染率最高，为17.0%，见表4。
■
2.5 药敏试验结果 试验结果显示，60株大肠杆菌分离株对15种药物均出现不同程度的耐药性，平均耐药率为61.7%，且多重耐药现象比较普遍，81.7%以上的分离菌株对7种以上抗生素具有耐药作用，这说明山东地区肉鸡大肠杆菌的耐药性相当严重。其中对头孢哌酮、阿米卡星、大观霉素敏感度较高，高敏以上菌株占51.7%～70%，耐药率为5%～10%;对左氟沙星、氧氟沙星、卡那霉素敏感度次之，中敏以上菌株占53.3%～65%，耐药率为35%～46.7%;对多粘菌素、头孢曲松、妥布霉素、诺氟沙星、头孢噻吩、青霉素、环丙沙星、氨苄西林、头孢唑啉敏感度最低，高敏以上菌株低于3.3%，耐药率高于53.3%，见表5。 ■
3 肉仔鸡“肺水肿”的防治措施
3.1 加强饲养管理 改善环境卫生，注意鸡舍通风换气，可根据情况进行间歇式通风;注意舍内的空气湿度，可以通过喷雾保持空气湿润，降低空气中有害物质;给鸡群提供全价优质饲料，保证充足的维生素、矿物质和电解质，增强机体抵抗力，提高呼吸道粘膜免疫功能，防止继发感染的发生。
3.2 建立生物安全体系 健全各种消毒制度和设施，进行带鸡消毒，对用具、食槽、水槽、接触病鸡的人员及污染场地严格消毒，鸡粪要定期做无害化处理，病死鸡做深埋或焚烧处理。同时要做好切断传染源的工作，严格控制外来人员进入鸡舍，对于进出鸡场的车辆要彻底消毒。
3.3 做好免疫接种 与其他病毒性疾病一样，接种疫苗是预防H9N2亚型禽流感发生与传播的最有效手段之一。在肉鸡10日龄左右给予禽流感油乳苗皮下注射0.3ml[4]，并且定期对鸡群进行实验室禽流感的抗体检测，使鸡群保持较高的抗体水平。
3.4 科学用药 对于该病的防治，关键在于控制其继发感染大肠杆菌。在发病早期，可以投服一些抗病毒药物，如黄芪多糖，并以疏通呼吸道、平喘、止咳、化痰、增强机体抵抗力为主;发病中期以防止支气管阻塞和继发感染为主，可通过药敏试验选择敏感药物如头孢哌酮、阿米卡星等对症治疗。用药时遵循以下原则：正确诊断，对症下药;根据抗菌药自身特性和疾病特点来选择给药途径;正确掌握用量和疗程;最好能依据药敏试验结果来选择药物;尽量避免使用影响免疫反应和生产性能的药物等[5]。
4 讨论
本次调查结果表明，山东省肉仔鸡“肺水肿”的总体感染率为63.9%，在调查的36个肉鸡养殖场中有23个养殖场检测结果为阳性。该病发病率有一定的日龄和季节差异，25～32日龄肉鸡患该病的几率最高，约为39.6%，而1～8日龄以下肉鸡发病率最低，仅为1.9%，这可能与雏鸡体内母源抗体水平较高有关。冬春季节发病率高，可能由于冬春季节气候多变，肉鸡养殖以保温为主，饲养密度过高，通风不良，舍内空气含尘量大，氨气、硫化氢等有害气体浓度过高，这些不利环境因素损伤上呼吸道粘膜，使机体对H9亚型AIV的感染更为敏感，然后继发感染大肠杆菌。
使用抗菌药物是治疗大肠杆菌病的主要方法，但是在治疗大肠杆菌病的同时，产生了各种耐药菌株。刘聚祥等[6]用氟苯尼考、氧氟沙星等12种抗菌药物对从东北、河北、山东、华东等地分离的21株鸡致病性大肠杆菌进行药敏检测，结果表明：21株菌均为多重耐药菌株，说明鸡致病性大肠杆菌的耐药性日益增强，耐药谱越来越广。该研究通过药敏试验对临床上常用的15种药物进行了筛选，亦发现分离菌株均出现不同程度的耐药性，且多重耐药现象比较普遍，说明山东地区肉鸡大肠杆菌的耐药性相当严重。其中对头孢哌酮、阿米卡星、大观霉素敏感度较高，高敏以上菌株占51.7%～70%，耐药率为5%～10%，为治疗大肠杆菌病的首选药物。
通过对山东省肉仔鸡“肺水肿”病进行流行病学调查，发现“肺水肿”的发病率与肉鸡的饲养管理水平、日龄、季节、免疫等都有关，因此在预防“肺水肿”疾病中要考虑各种影响其发病的因素，采取综合的防治措施。日常要实行科学的饲养管理，建立良好的生物安全体系，健全各种消毒制度和设施;要完善并强化免疫制度，搞好定期预防接种;通过药敏试验筛选敏感有效药物，进行对症治疗，以防止继发感染的发生。
参考文献：
[1] 王光锋，李舫，李汝春，等.肉仔鸡“肺水肿”病原的分离与鉴定[J].中国家禽，2014，36（19）：53-56.
[2] 中华人民共和国卫生部.食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数[S].北京，2012.
[3] 蔡宝祥.动物传染病诊断学[M ].4版. 北京：中国农业出版社，2001：46-47.
[4] 沙明利，任晚霞，齐洪艳.浅谈鸡呼吸道疾病的病因及防治[J].家禽科学，2010，4：28-29.
[5] 王雪玲.鸡大肠杆菌病防治研究进展[J].河南畜牧兽医，2012，33（8）：5-6.
[6] 刘聚祥，李宏娟，李占雷，等.我国部分地区鸡致病性大肠杆菌的耐药性检测与分析[J].河北农业大学学报，2007，30（5）：94-98.