【摘 要】
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目的:观察雷帕霉素对葡萄糖诱导SD大鼠阴茎海绵体平滑细胞(CCSMC)自噬与凋亡的影响.方法:原代分离纯化鉴定CCSMC后分别用5.6、10、20、30、40 mmol/L葡萄糖处理CCSMC 48 h,mC
【机 构】
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湖北医药学院,基础医学院,湖北十堰442000;湖北医药学院,胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,湖北十堰442000;湖北医药学院,南水北调水源区环境与健康研究中心,湖北十堰442000;湖北医药学院,
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目的:观察雷帕霉素对葡萄糖诱导SD大鼠阴茎海绵体平滑细胞(CCSMC)自噬与凋亡的影响.方法:原代分离纯化鉴定CCSMC后分别用5.6、10、20、30、40 mmol/L葡萄糖处理CCSMC 48 h,mCherry-GFP-LC3B双荧光腺病毒转染细胞检测自噬流情况;Western印迹及PCR检测自噬相关指标、自噬相关基因5(ATG5)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62、Beclin-1的蛋白和mRNA水平的变化;流式细胞术检测不同浓度葡萄糖处理后细胞凋亡情况,然后再检测用600 nmol/L雷帕霉素预处理2h再用40 mmol/L葡萄糖处理CCSMC 48 h后自噬相关指标LC3、Beclin1、P62的蛋白和mRNA水平的变化以及细胞凋亡的变化情况.结果:mCherry-GFP-LC3B双荧光腺病毒转染及PCR、Western印迹均提示在不同浓度葡萄糖处理后均发生了自噬现象,随着葡萄糖浓度升高,在10 mmol/L葡萄糖组自噬现象最强(P＜0.05),之后随着葡萄糖浓度升高自噬现象逐渐减弱(P＜0.05);流式细胞术检测发现相对于5.6 mmol/L葡萄糖组,10 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率无显著升高(P=0.302),但随着葡萄糖浓度升高,细胞凋亡率逐渐升高(P＜0.01).给予雷帕霉素预处理后,Western印迹及PCR检测均提示LC3的蛋白表达量,Beclin1的蛋白和mRNA表达量增多(P＜0.05),而P62的蛋白和mRNA表达量降低(P＜0.05),表明自噬增强.细胞凋亡率在雷帕霉素预处理后也显著降低(P＜0.01).结论:当不同浓度葡萄糖体外培养CCSMC,葡萄糖浓度在一定范围内时可能促进自噬,从而对CCSMC起到保护作用,但葡萄糖浓度超过一定浓度后,可能超过了CCSMC承受的范围,出现自噬降低,促进细胞凋亡,从而损害细胞活力和功能.而高浓度葡萄糖作用于CCSMC,雷帕霉素可能通过增强自噬,抑制细胞凋亡水平,从而对CCSMC起到保护作用.
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