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目的 构建含Egr-1启动子和Smad7 cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并研究射线诱导Egr-1基因启动子调控Smad7体外表达的时间和剂量效应,为下一步的基因治疗奠定基础.方法以Adeno-XTM表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为Egr-1启动子,将Smad7 cDNA亚克隆至穿梭质粒内,与腺病毒DNA重组,在HEK293细胞中进行包装、扩增,纯化测定病毒滴度.通过Western blot检测X射线照射激活Egr-1启动子调控Smad7体外表达的时间和剂量效应.结果经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了含Egr-1启动子和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒pAdES.病毒滴度为3.0×1011 TCID50/ml.感染重组腺病毒的靶细胞经不同剂量的深部X射线照射后Smad7蛋白表达量存在一定的时间、剂量差异:实验组Smad7蛋白表达量在照射后1 h即已升高,2～7 h之间维持在一个较高水平,尔后表达量开始下降;实验组中Smad7蛋白表达量随着吸收剂量的增加而增加,在8～15Gy之间维持一个较高的表达水平.而对照组Smad7蛋白表达量无明显的时间和剂量效应.结论成功构建了含Egr-1启动子和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒pAdES,重组于腺病毒内的Egr-1启动子经射线激活后具有调控下游Smad7表达的活性。