【摘 要】
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目的:建立检测急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物（NRAS）基因突变的drop-off微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）方法,并评价该方法的临床应用价值。方法:针对NRASG12和G13突变位点设计特异性drop-off dd PCR引物和探针,建立最佳反应体系,并对该方法进行性能验证。应用该
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81970118）； 江苏省医学创新团队（CTXDB201702）； 镇江市血液病临床医学研究中心（SS2018009）； 镇江市社会发展项目（SH2019067,SH2022026）；
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目的:建立检测急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物（NRAS）基因突变的drop-off微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）方法,并评价该方法的临床应用价值。方法:针对NRASG12和G13突变位点设计特异性drop-off dd PCR引物和探针,建立最佳反应体系,并对该方法进行性能验证。应用该方法对140例临床样本进行初筛,其检测结果与Sanger测序进行比较,并用二代测序（next generation sequencing,NGS）进行验证。结果:建立drop-off dd PCR检测NRAS基因G12/G13突变的方法,灵敏度达0.158%,重复性、线性良好,其空白限为5.40拷贝数/μL,最低检测下限为15.84拷贝数/μL。在140例初诊AML患者中,drop-off dd PCR检出NRAS突变28例（20%）,其突变负荷为0.26%～52.85%（中位2.14%）;而Sanger测序仅检出7例（5%）阳性,为进一步验证,将21例Sanger测序结果阴性而drop-off dd PCR检测阳性的样本进行NRAS基因NGS,检出14例阳性,而另外7例NGS阴性的样本,其drop-off dd PCR检测突变频率为0.53%～1.50%（中位1.10%）。结论:建立了drop-off dd PCR技术检测AML患者中NRAS基因突变的方法,该方法灵敏度高,可用于对NRAS基因G12/G13突变进行定量检测,以期用于AML患者预后判断和疾病监测。
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