【摘 要】
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目的 通过构建分子量大小为200 kD的黏着斑激酶家族相互作用蛋白(FIP200)3'UTR双荧光素酶报告基因载体,研究FIP200与miR-3133的靶向关系.方法 采用生物信息学软件targetscan
【机 构】
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浙江省台州市立医院耳鼻咽喉科,浙江台州318000;浙江省台州市立医院妇科,浙江台州318000
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目的 通过构建分子量大小为200 kD的黏着斑激酶家族相互作用蛋白(FIP200)3'UTR双荧光素酶报告基因载体,研究FIP200与miR-3133的靶向关系.方法 采用生物信息学软件targetscan预测miR-3133与FIP200 3'端非翻译区(3'UTR)潜在的互补结合位点;利用PCR扩增FIP200基因3'UTR序列,并克隆到psicheck2载体中,构建FIP200野生型和突变型重组双荧光素酶报告基因载体;将野生型psicheck2-FIP200-wt 3'UTR或突变型psicheck2-FIP200-mut3'UTR双荧光素酶报告质粒分别与miRNA-3133 mimics或mimics-NC共转染CNE-1细胞;通过双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性,观察miRNA-3133对FIP200表达的影响.结果 生物信息学分析显示FIP200 3'UTR与miRNA-3133有潜在的结合位点,酶切和测序结果表明野生型和突变型双荧光素酶报告载体构建成功;双荧光素酶报告系统检测显示,miRNA-3133可抑制野生型FIP200载体的荧光素酶的表达(P ＜0.05),而对突变型载体的荧光素酶表达无影响(P ＞0.05).结论 成功构建FIP200基因3'UTR的双荧光素酶报告载体,miRNA-3133可以直接靶向调控FIP200基因的表达.
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