六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响

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目的 研究六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响。方法 采用PCR法扩增目的基因,克隆入pMD18-T载体后进行序列测定。构建原核表达载体pET28-His-Cpn10-IL-4与pET28-Cpn10-His-IL-4,在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达两种在不同位置带有六聚组氨酸(His-tag)的重组白细胞介素4(rhIL-4)融合蛋白。用SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达产物,采用镍亲和层析的方法纯化两种重组融合蛋白。结果 Western印迹证实两种融合蛋白均可与抗组氨酸单克
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