【摘 要】
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家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的晚期表达因子LEF-6可以促进病毒晚期基因的转录.为深入了解lef-6基因在病毒感染过程中的作用及其对宿主细胞的影响,采用Red重组法将病毒原有基因
【机 构】
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浙江理工大学生命科学与医药学院,杭州310018;浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室,杭州310018
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家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的晚期表达因子LEF-6可以促进病毒晚期基因的转录.为深入了解lef-6基因在病毒感染过程中的作用及其对宿主细胞的影响,采用Red重组法将病毒原有基因lef-6敲除,构建了lef-6缺失型Bacmid(lef-6-ko-Bacmid)并转染BmN细胞,然后利用Bac-to-Bac系统将lef-6基因异位补回,构建了lef-6补回型Bacmid(lef-6-re-Bacmid).qRT-PCR检测结果表明,lef6基因缺失后,病毒基因组的复制水平和各时期(早期、晚期和极晚期)基因转录水平均有下降趋势;此外,病毒凋亡抑制基因iap2在转录水平也有所下调.进一步通过Western blot检测,发现let6过表达可引起BmN细胞内凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平上升,凋亡促进蛋白Bax的表达水平下调,从而抑制细胞凋亡.综上所述,let6基因缺失会导致病毒复制水平和基因转录水平降低,同时可通过调控Bcl-2和Bax蛋白的表达水平进一步影响宿主细胞的凋亡过程.研究结果为深入了解BmNPV与宿主家蚕的互作机制提供了新的信息.
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