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目的 探索脂肪于细胞(ADSCs)的标记方法,观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性ADSCs(EGFP-ADSCs)的体外活性、干细胞特性及体内短期活性. 方法 用携带增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的慢病毒载体(Lv-eGFP)在感染复数(MOI)为0、1、5、25、50、100时,转染SD大鼠ADSCs 12 h,荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率和荧光强度;MTT法评价转染后细胞活性;EGFP-ADSCs分别行成脂分化及油红O检测、成骨分化及茜素红染色;将EGFP-ADSCs注射到去细胞神经构建组织工程化神经,修复大鼠坐骨神经缺损,术后1周取材进行冰冻切片观察细胞在体内存活情况. 结果 转染4d后,EGFP阳性率及荧光强度达到高峰;EGFP基因表达不随细胞传代而消失.MOI=0、1、5、25、50、100时,EGFP阳性转染率分别为0.13％、31.09％、75.33％、92.66％、96.70％、98.38％.实验组阳性率与对照组(MOI =0)选择相比,差异均有统计学意义(P ＜0.05);MOI =25、50、100时,组间阳性率差异无统计学意义(P＞0.05),但与MOI=1、5比时差异(P＜0.05).MTT试验观察10 d内MOI=25、50、100组细胞增值活性与非转染细胞差异无统计学意义(P＞0.05).选择MOI =25作为最佳转染滴度进行后续实验.转染后ADSCs成骨、成脂分化20 d,茜素红染色见橘红色钙沉积,油红O染色见橙红色脂滴.1周冰冻切片观察细胞于体内呈梭形,均匀分布. 结论 慢病毒载体转染EGFP基因不影响ADSCs活性及成骨成脂分化能力,能为组织工程化神经修复缺损提供示踪种子细胞的方法。