目的:构建三维微环境复合体培养体系,探索骨髓源性间充质干细胞在支架内生长、分化的规律。方法:通过贴壁培养法建立稳定的骨髓源性间充质干细胞系,采用流式细胞仪检测细胞表面标志;将壳聚糖,β-甘油磷酸钠及羟乙基纤维素按比例混合制备温敏性水凝胶。选取第3代骨髓源性间充质干细胞接种支架培养2周后,加入心肌组织裂解液培养5d。倒置相差显微镜下连续观察细胞形态变化的特征,收集细胞支架复合物行苏木精—伊红染色,扫描电镜观察其超微结构。结果:骨髓源性间充质干细胞经流式细胞仪检测表达CD29,不表达CD34。温敏性水凝胶含交织成网格状的纤维样结构,网孔内含胶冻样物质。骨髓源性间充质干细胞接种后呈球形,折光性好,不仅分布于纤维样结构表面,还渗入网孔内生长;HE染色支架呈嗜酸性;扫描电镜下可见支架具有适宜的孔径,细胞在支架上分裂增殖活跃;添加心肌组织裂解液后,细胞逐渐拉长呈梭形。结论:在构建的三维微环境复合培养体系中,骨髓源性间充质干细胞与支架生物相容性良好;复合培养体系能较好的模拟体内微环境,促进骨髓源性间充质干细胞的增殖、分化。