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摘 要：建立反相高效液相色谱法测定黄连解毒药剂中黄芩苷的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相，检测波长为280nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。黄芩苷在20～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。黄芩苷平均回收率分别为99.3%。结论：本法简便、准确，可用于黄连解毒药剂中黄芩苷的含量测定。
关键词：黄芩苷；含量；测定
黄连解毒药剂由黄连、黄柏、黄芩、栀子组成。黄连解毒药剂，为清热剂，具有清热解毒之功效。黄连解毒药剂主治三焦火毒证，主要用于治疗败血症、脓毒血症、痢疾、肺炎、泌尿系感染、流行性脑脊髓膜炎、乙型脑炎等属热毒为患者。《医方考》记载“：用黄连泻心火，黄芩泻肺肝之火，黄柏泻肾火，栀子泻上下之火。”黄芩为黄连解毒药剂主要成分。黄芩本名“芩”，是为芩草，因草色黄而有俗名“黄芩”。黄芩具有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效，主治温热病、湿热黄胆、肺炎、痢疾、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
黄芩具有抗病毒、抗菌、抗氧化、抗过敏、保护神经元等多方面的药理作用，在抗人类免疫缺陷病毒、抗肿瘤等方面具有潜在的开发应用价值[1-5]。黄芩苷具有镇静、降压、清除自由基、抗心律失常、抗肺炎衣原体所致的动脉粥样硬化作用等。本文采用高效液相法对黄连解毒药剂中的黄芩苷的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：ELGA PURELAB Ultra 实验室超纯水系统（天津市劳尔科技有限公司）；XP204分析天平（北京联博永通科技有限公司）；SPCC-220E-国产全自动实验室洗瓶机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；声彦SCQ-1000B超声波提取仪（上海声彦超声波仪器有限公司）；759S紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；iChrom 5100高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：黄芩苷。
1.4 试剂：甲醇（济南英出化工科技有限公司）、三乙胺（济南英出化工科技有限公司）、辛烷磺酸钠（天津中和盛泰化工有限公司）、草酸溶（天津中和盛泰化工有限公司）、磷酸（广州市新易化工有限公司）、冰醋酸（天津中和盛泰化工有限公司）、乙腈（天津中和盛泰化工有限公司）。
1.5 试药：黄连解毒药剂。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相，检测波长：280nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含60μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 专属性试验
依照处方取除黄芩，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芩苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为60μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.53%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量黄芩苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，黄芩苷在20～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的黄芩苷样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.62%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.3%，RSD为0.63%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为15.5mg/g、15.6mg/g、15.3mg/g。
3 讨论
分别考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），乙腈-0.1%的辛烷磺酸钠的0.1%的草酸溶液（35∶65），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-水（55∶45），甲醇-水-冰醋酸（33∶65∶1），乙腈-0.1%的辛烷磺酸钠的0.1%的草酸溶液（30∶70），乙腈-0.4%磷酸溶液（10∶90），甲醇-水-冰醋酸（52∶48∶0.1），甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）不同比例的流动相，结果以甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于黄连解毒药剂中黄芩苷的含量测定。
参考文献
[1]龚明玉，于晓敏，周晓慧，杨鹤酶.黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响[J].时珍国医国药，2008（1）.
[2]徐俊，黄榕，杨于嘉，金世杰，张金凤，程光辉.黄芩苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠髓鞘的保护作用[J].临床神经病学杂志，2007（6）.
[3]程发峰，宋文婷，郭少英，钟相根，鲁艺，王庆国.黄芩苷对大鼠原代皮层神经元过氧化氢损伤的保护作用[J].中华中医药杂志，2011（5）.
[4]王雅芳，李婷，唐正海，陈修平，王一涛，陆金健.中药黄芩的化学成分及药理研究进展[J].中华中医药学刊，2015（1）.
[5]王玮，白月，王俊平，姜殿军.黄芩茎叶总黄酮对大鼠气囊滑膜炎抗炎作用机制的研究[J].中国冶金工业医学杂志，2009（4）.
关键词：黄芩苷；含量；测定
黄连解毒药剂由黄连、黄柏、黄芩、栀子组成。黄连解毒药剂，为清热剂，具有清热解毒之功效。黄连解毒药剂主治三焦火毒证，主要用于治疗败血症、脓毒血症、痢疾、肺炎、泌尿系感染、流行性脑脊髓膜炎、乙型脑炎等属热毒为患者。《医方考》记载“：用黄连泻心火，黄芩泻肺肝之火，黄柏泻肾火，栀子泻上下之火。”黄芩为黄连解毒药剂主要成分。黄芩本名“芩”，是为芩草，因草色黄而有俗名“黄芩”。黄芩具有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效，主治温热病、湿热黄胆、肺炎、痢疾、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
黄芩具有抗病毒、抗菌、抗氧化、抗过敏、保护神经元等多方面的药理作用，在抗人类免疫缺陷病毒、抗肿瘤等方面具有潜在的开发应用价值[1-5]。黄芩苷具有镇静、降压、清除自由基、抗心律失常、抗肺炎衣原体所致的动脉粥样硬化作用等。本文采用高效液相法对黄连解毒药剂中的黄芩苷的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：ELGA PURELAB Ultra 实验室超纯水系统（天津市劳尔科技有限公司）；XP204分析天平（北京联博永通科技有限公司）；SPCC-220E-国产全自动实验室洗瓶机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；声彦SCQ-1000B超声波提取仪（上海声彦超声波仪器有限公司）；759S紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；iChrom 5100高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：黄芩苷。
1.4 试剂：甲醇（济南英出化工科技有限公司）、三乙胺（济南英出化工科技有限公司）、辛烷磺酸钠（天津中和盛泰化工有限公司）、草酸溶（天津中和盛泰化工有限公司）、磷酸（广州市新易化工有限公司）、冰醋酸（天津中和盛泰化工有限公司）、乙腈（天津中和盛泰化工有限公司）。
1.5 试药：黄连解毒药剂。
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相，检测波长：280nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含60μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 专属性试验
依照处方取除黄芩，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芩苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为60μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.53%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量黄芩苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，黄芩苷在20～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的黄芩苷样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.62%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.3%，RSD为0.63%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为15.5mg/g、15.6mg/g、15.3mg/g。
3 讨论
分别考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），乙腈-0.1%的辛烷磺酸钠的0.1%的草酸溶液（35∶65），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-水（55∶45），甲醇-水-冰醋酸（33∶65∶1），乙腈-0.1%的辛烷磺酸钠的0.1%的草酸溶液（30∶70），乙腈-0.4%磷酸溶液（10∶90），甲醇-水-冰醋酸（52∶48∶0.1），甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）不同比例的流动相，结果以甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-磷酸（47∶53：0.2）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于黄连解毒药剂中黄芩苷的含量测定。
参考文献
[1]龚明玉，于晓敏，周晓慧，杨鹤酶.黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响[J].时珍国医国药，2008（1）.
[2]徐俊，黄榕，杨于嘉，金世杰，张金凤，程光辉.黄芩苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠髓鞘的保护作用[J].临床神经病学杂志，2007（6）.
[3]程发峰，宋文婷，郭少英，钟相根，鲁艺，王庆国.黄芩苷对大鼠原代皮层神经元过氧化氢损伤的保护作用[J].中华中医药杂志，2011（5）.
[4]王雅芳，李婷，唐正海，陈修平，王一涛，陆金健.中药黄芩的化学成分及药理研究进展[J].中华中医药学刊，2015（1）.
[5]王玮，白月，王俊平，姜殿军.黄芩茎叶总黄酮对大鼠气囊滑膜炎抗炎作用机制的研究[J].中国冶金工业医学杂志，2009（4）.