T抗氧化活性参与蒲公英对小鼠实验性胃溃疡的保护作用

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  摘要 目的:观察蒲公英对乙醇诱导的小鼠实验性胃溃疡的保护效果,并探讨其可能机制。方法:小鼠随机分为正常对照组、模型组和蒲公英高、中、低剂量组[15、5、1.5 g/(kg·d)],每组10只。各组灌胃给药1次/d,连续7 d。末次给药后,灌胃无水乙醇8 mL/kg诱导实验性胃溃疡模型。造模4 h后,分析蒲公英对模型小鼠胃溃疡指数、损伤抑制率,血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜溃疡指数显著上升,血清SOD活性下降,MDA和NO含量增加(P<0.01)。相对于模型组,蒲公英15、5 g/(kg·d)组小鼠胃黏膜损伤指数显著降低(P<0.01),血清SOD活性增强(P<0.01或P<0.05),MDA和NO水平降低(P<0.01)。结论:蒲公英对乙醇诱导的实验性胃溃疡具有良好的保护效应,其作用机制可能与增强机体抗氧化能力,抑制过量NO产生相关。
  关键词 蒲公英;实验性胃溃疡;超氧化物歧化酶;丙二醛;一氧化氮
  Abstract Objective:To evaluate the protective effect of dandelion on ethanol induced gastric ulcer and investigate its possible mechanism in mice.Methods:A total of 50 mice were randomly divided into normal group,model group,dandelion high,medium and low dose groups [15,5,1.5 g/(kg·d)],with 10 mice in each group.Administration of dandelion prior to ethanol ingestion dose-dependently inhibited gastric ulcer.After 4 h modeling,the gastric mucosal lesion was assessed by ulcer area,and mucosal injury index and injury inhibition rates were calculated.The contents of malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO) in serum were measured.The activity of superoxide dismutase (SOD) was also determined.Results:Compared with the control group,the mucosal injury index,contents of MDA and NO in serum were markedly increased in the model group (P<0.01),and the activity of SOD was significantly decreased in mice model with gastric ulcer (P<0.01).Compared with the model group,dandelion [15,5 g/(kg·d)] significantly reduced the gastric ulcer index,raised the activity of SOD in serum (P<0.01 or P<0.05).In addition,dandelion also significantly inhibited MDA and NO concentrations in serum in the mice exposed to ethanol induced ulceration (P<0.01 or P<0.05).Conclusion:Dandelion has good protective efficacy in treating ethanol induced gastric ulcer in mice.Its mechanism might be related to enhancing endogenous antioxidant capacity and inhibition of overproduction of NO.
  Key Words Dandelion; ethanol-induced gastric ulcer; Superoxide dismutase; Malondialdehyde; Nitric oxide
  中圖分类号:R285.5文献标识码:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2018.04.049
  蒲公英是一味临床常用中药材,为菊科植物蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)、碱地蒲公英(Taraxacum.sinaicum Kitag)或同属数种植物的干燥全草。始载于《新修本草》,其味苦甘,性寒,入肝胃二经,具清热解毒、消痈散结、利湿健胃、通乳明目、清肝利胆等功效[1]。临床实践表明,蒲公英可用于治疗慢性胃炎、消化道溃疡等胃肠道疾病[2-3]。一些药理研究也表明,蒲公英具有良好抗胃损伤等作用[3-4],但鲜见具体机制研究。为此本实验通过观察蒲公英水煎液对乙醇诱导实验性胃溃疡模型的影响,通过分析血清中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和一氧化氮(Nitric Monoxide,NO)含量,探讨其抗乙醇型胃溃疡作用机制,以期为蒲公英的临床实践和进一步开发利用提供一定的实验基础。   1 材料与方法
  1.1 材料
  1.1.1 动物 ICR清洁级小鼠50只,体重20~25 g,雌雄各半,由吴氏实验动物公司提供,动物合格证SCXK(闽)2012-0001号,按清洁级要求饲养,饲养条件:室温22~28 ℃,相对湿度40%~70%,标准颗粒饲料喂养。
  1.1.2 药物 蒲公英购自福建中医药大学附属第三人民医院。参照文献[5]方法,取200 g该药加1 000 mL水浸泡2 h,水煎2次,煎液过滤,混合浓缩至含生药量1 g/mL,4 ℃保存备用。
  1.1.3 试剂与仪器 超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(批号20141103)和丙二醛(MDA)检测试剂盒(批号20141105)均为南京建成生物工程研究所产品,一氧化氮(NO)检测试剂盒(批号20141022)购自碧云天生物技术研究所,其余试剂均为国产分析纯。UV-1100型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司),ELX800全自动酶标仪(美国伯腾仪器有限公司)。
  1.2 方法
  1.2.1 分组与模型制备 将小鼠采用完全随机化原则随机分成5组,每组10只,即正常对照组、蒲公英高、中、低剂量组[(15、5、1.5 g/(kg·d)]和模型对照组。参照文献[6]方法,末次给药前禁食不禁水22 h,末次给药1 h后,模型组和给药组灌胃无水乙醇8 mL/kg诱导实验性胃溃疡,正常对照组灌胃等量的生理盐水。
  1.2.2 给药方法 各给药组连续7 d灌胃给药,1次/d。模型对照组和正常对照组灌胃适量的生理盐水。
  1.2.3 样品采集与测定造模4 h后,摘除小鼠眼球采血,分离血清,参照试剂盒说明书所述方法,检测各组样品MDA、NO的含量和SOD活性。采血后,颈椎脱臼法处死小鼠,剖腹取胃,沿胃大弯剪开,用生理盐水洗净内容物,于解剖镜下观察并计算各组溃疡指数和抑制率。溃疡指数按Guth标准计分:1)点状溃疡:出血性糜烂小点或黏膜缺损<1 mm,为点状溃疡,每3个计1分;2)条状出血:测量溃疡面的最大长径和垂直于最大长径的最大宽径,二者的乘积计为损伤指数:宽为1 mm的溃疡面每1 mm长计1分;宽为2 mm者每1 mm长计2分;宽为3 mm者每1 mm长计3分。溃疡抑制率按下式计算:溃疡抑制率(%)=(平均模型组溃疡指数-平均实验组溃疡指数)/平均模型组溃疡指数×100%。
  1.2.4 统计学方法 采用SPSS 18.0软件对所有数据进行分析,用均数±标准差(±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析进行检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 蒲公英对实验性胃溃疡模型小鼠胃黏膜的影响 解剖镜下观察,正常对照组小鼠胃黏膜表面无糜烂、溃疡和出血点,色泽较为红润;模型组小鼠多见点、线状出血,黏膜糜烂或溃疡等,损伤明显。与模型组比较,各给药组的胃黏膜损伤程度均有不同程度减轻。胃黏膜溃疡指数统计结果表明,各蒲公英剂量组均能明显抑制无水乙醇诱导的胃黏膜损伤。相对于模型组,各药物组的胃黏膜溃疡指数均显著下降(P<0.05),其中5 g/(kg·d)剂量组损伤程度最低,抑制率最高(52.27%),提示适量的蒲公英能拮抗乙醇诱导的急性胃黏膜损伤。见表1。
  2.2 蒲公英对实验性胃溃疡模型小鼠血清SOD、MDA和NO水平的影响 与正常对照组比较,小鼠灌胃乙醇可引起血清SOD活性下降(P<0.01)和MDA、NO含量的上升(P<0.01)。与模型组比较较,中、高剂量给药组能增加模型小鼠血清中SOD活性(P<0.01,P<0.05),但低剂量给药组对血清SOD活性的影响无统计学意义(P>0.05)。相对于模型组,各给药组还能降低小鼠血清中MDA和NO含量(P<0.01,P<0.05)。
  3 討论
  胃溃疡是一种临床常见消化系统疾病,多为胃肠黏膜被消化液自身消化所致的超过黏膜肌层的组织损伤,属于中医学中的“胃脘痛”“痞满”“腹痛”等范畴。该病具有病程长、常复发等特点[7]。一些报道表明,中医药在治疗胃溃疡方面具有整体和辨证论治的特点,疗效显著,不易复发[8]。
  蒲公英乃清热解毒消痈之良药,可复方配伍,亦可单方应用于治疗慢性胃炎、胃、十二指肠溃疡等胃肠道疾病[2]。《本草新编》即记载:“蒲公英亦泻胃火之药,但其气甚平,既能泻火,又不损土,可以长服久服而无碍”,表明蒲公英用于治疗胃脘痛等疾病由来已久。本研究结果表明,单味蒲公英可有效抑制乙醇诱导的小鼠胃黏膜损伤,使胃黏膜溃疡指数显著下降。在实验剂量中,中剂量组[5 g/(kg·d)]的抗溃疡作用最强。这一结果与早期的类似研究报道相吻合[5,9-11],提示一定剂量的蒲公英对乙醇致实验性胃溃疡具有良好的保护作用。
  有报道表明,高浓度乙醇导致机体产生大量的超氧化阴离子、羟自由基等自由基,抑制SOD等抗氧化体系的活性,增强脂质过氧化反应,从而引起胃黏膜受损[12]。本研究对小鼠灌胃无水乙醇(8 mL·kg-1)诱导实验性胃溃疡。造模后发现,模型组小鼠血清中SOD活性下降,MDA含量增加,相应的溃疡指数增加。而蒲公英可显著抑制乙醇处理所致的小鼠血清MDA增加,提高SOD活性。这提示蒲公英具有显著的抗氧化活性,可有效拮抗乙醇对小鼠胃黏膜的氧化损伤。此前,已有多项研究证实蒲公英具有抗氧化活性。蒲公英的水提物可以清除羟自由基[13],可提高急性肺损伤小鼠的抗氧化能力[14]。它的总黄酮提取液能提高衰老小鼠脑组织内SOD活性,抑制MDA的产生,提高衰老小鼠的抗氧化能力[15]。这些小组的结果无疑与本研究结果相互印证。另一方面,成分分析结果表明,蒲公英含有多种抗氧化成分,其中主要抗氧化剂是黄酮类物质[3],具有较强的活性氧清除能力[16]。
  NO是生物体内具有多种生物学活性的自由基气体。适度的NO可舒张血管,增加胃黏膜血流量,维持胃黏膜上皮完整性,参与胃黏膜细胞保护。然而病理状态下,大量产生的NO可与氧自由基结合生成过氧化亚硝酸离子(ONOO-),导致细胞脂质过氧化损伤,引起急慢性炎性反应[17]。本研究中,模型组小鼠血清NO与正常对照组比较有显著升高,提示快速产生大量NO可能是乙醇型实验性胃溃疡的一个诱因。各给药组均能使实验性胃溃疡小鼠血清中异常升高的NO明显下降,且抑制效果与其抗胃黏膜损伤的效应呈现出一定相关性。类似的NO含量变化在一些中药抗胃溃疡机制的研究中亦有报道,如半四左方[18]、散血草水提物和白屈菜赤碱(Chelerythrine)[6]等。因此,下调异常升高的NO水平可能是蒲公英防治乙醇型胃溃疡的机制之一。   综上所述,本研究结果显示蒲公英能减轻乙醇所致小鼠急性胃黏膜损伤,提高模型小鼠外周血的SOD活性、降低脂质过氧化物MDA水平和NO含量。上述作用机制可能与蒲公英增强机体抗氧化能力,抑制过量NO产生,减轻NO所致氧化损伤相关。
  参考文献
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