【摘 要】
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目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表达。胶质瘤细胞U251随机分为miR-148a-3p inhibitor组和miR-148a-3
【机 构】
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山东第一医科大学附属济南人民医院神经外科 271199,山东第一医科大学附属济南人民医院神经外科 271199,山东第一医科大学附属济南人民医院神经外科 271199,山东第一医科大学附属济南人民医院
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目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。
方法实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表达。胶质瘤细胞U251随机分为miR-148a-3p inhibitor组和miR-148a-3p NC组，脂质体Lipofectamine™3000将miR-148a-3p inhibitor和miR-148a-3p NC转入胶质瘤细胞中，Real-time PCR检测miR-148a-3p表达，水溶性四唑蓝(WST)法检测细胞活力，Tanswell实验检测细胞迁移及侵袭能力，Real-time PCR法及蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CUL5蛋白及mRNA表达，并进行荧光素酶报告基因分析。组间比较采用t检验进行分析。
结果miR-148a-3p inhibitor组(0.31±0.03)中miR-148a-3p表达量低于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10，t＝5.479，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.375±0.037)细胞活力低于miR-148a-3p NC组(0.525±0.051，t＝4.587，P<0.05)；miR-148a-3p inhibitor组细胞克隆数目[(43.52±4.25)个]少于miR-148a-3p NC组[(148.79±14.88)个](t＝5.147，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(38.47±3.85)个]细胞迁移数目少于miR-148a-3p NC组[(185.59±18.56)个](t＝5.589，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(41.79±4.18)个]细胞侵袭数目少于miR-148a-3p NC组[(195.69±19.58)个](t＝6.482，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor＋ CUL野生型质粒的荧光强度(0.55±0.05)低于miR-148a-3p inhibitor＋CUL5突变型(1.01±0.10)、miR-148a-3p NC＋CUL5野生型(1.02±0.10)/突变型(1.03±0.10)。miR-148a-3p inhibitor组(1.89±0.18)中CUL5 mRNA表达量高于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10，t＝5.579，P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.42±0.04)中CUL5蛋白表达量高于miR-148a-3p NC组(1.43±0.14，t＝5.894，P<0.05)。
结论下调miR-148a-3p表达进而促进CUL5表达，最终抑制U251胶质瘤细胞增殖与侵袭。
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