【摘 要】
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目的构建含人CBFα1/RUNX2基因的过表达慢病毒载体。方法采用PCR技术体外扩增人CBFα1/RUNX2,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1/RUNX2,并进行酶
【基金项目】
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浙江省温州市科技局资助项目(编号:Y20070052);浙江省教育厅资助项目(编号:20070914)
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目的构建含人CBFα1/RUNX2基因的过表达慢病毒载体。方法采用PCR技术体外扩增人CBFα1/RUNX2,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1/RUNX2,并进行酶切及测序鉴定。鉴定正确的克隆转染293T细胞,经荧光显微镜观察和Western Blot检测hCBFα1/RUNX2基因在293T细胞内的瞬时表达。再利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1/RUNX2、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR检测病毒滴度。结果重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα1/RUNX2基因序列完全一致。荧光显微镜观察以及Western Blot印迹均证实pGC-FU-hCBFα1/RUNX2中携有正确的hCBFα1/RUNX2基因,并能在293T细胞中瞬时表达。包装慢病毒后实时荧光定量PCR检测病毒滴度为(2.00×108)TU/mL。结论成功构建了携带hCBFα1/RUNX2基因的重组慢病毒载体,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础。
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