论文部分内容阅读
目的 探讨重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因经尾静脉注射后转染小鼠心肌的可行性及安全性.方法 雄性C57BL小鼠随机分为病毒基因转染组和单纯生理盐水组.两组小鼠分别通过尾静脉注射病毒稀释液或等体积的生理盐水,分别于注射2周及4周后处死小鼠.Western印迹检测小鼠心脏、肝脏、肺脏和肾脏中细胞周期蛋白A2的表达,以评价腺相关病毒介导目的基因转染的靶向性.免疫组织化学检测细胞周期蛋白A2在心肌细胞中的表达及定位.检测增殖相关蛋白在各器官中的表达,明确转染后是否引起其他器官过度增殖,以评价其安全性.结果 细胞周期蛋白A2转染2周后在小鼠心脏开始出现表达,第4周呈稳定表达,而对照组细胞周期蛋白A2的表达则相对较少(2周:0.13％±0.01％比25.97％±2.24％,4周:0.14％±0.02％比73.70％±3.10％),两组比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).而两组小鼠肝脏、肺脏、肾脏中细胞周期蛋白A2的表达差异无统计学意义(均为P＞ 0.05).细胞周期蛋白A2转染心肌后主要定位于心肌细胞胞质中,胞核中较少表达.转染心肌组织后,增殖细胞核抗原(PCNA)表达增加(2周:13.10％±0.54％比65.80％±3.44％,4周:12.90％±0.34％比71.20％±1.58％),两组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).而有丝分裂特异性蛋白磷酸化组蛋白H3(H3P)在两组中的表达差异无统计学意义(均为P＞0.05).PCNA在肝脏、肾脏、肺脏中的表达差异无统计学意义(均为P＞0.05).结论 重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因可靶向转染小鼠心肌,并能重新启动心肌细胞的细胞周期进程,且转染后不会引起其他器官的过度增殖,具有安全性及可行性。