小同功型人硒蛋白P的诱导凋亡活性

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目的 研究小同功型人硒蛋白P(HSelP)的作用。方法 克隆HSelP小同功型基因,将位于N端40位的硒半胱氨酸(SeCys)突变为半胱氨酸,测序确定后,在感受态大肠杆菌BL21中大量表达,表达产物HSelP280m用阴离子交换层析纯化,Western blot方法鉴定。提取小鼠肝细胞线粒体,通过荧光光谱仪检测线粒体悬液90°光散射强度和罗丹明123荧光光度变化,确定不同浓度HSelP280m引起的线粒体膜透过性转运孔(PIP)开放程度和线粒体跨膜电位的变化。结果 成功地将HSelP小同功型中SeCys点突变为半胱氨酸,在原核表达系统中获得大量表达。表达产物纯化后纯度达90%以上。HSelP280m可促进线粒体PTP开放,跨膜电位下降,且有剂量依赖关系,可被PTP的特异抑制剂所抑制。此作用在去除N端40个氨基酸后丧失。结论 HSelP280m有促进线粒体PTP开放的作用,为进一步研究HSelP的结构和功能提供了线索。

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