观察降钙素相关基因肽(CGRP)对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化能力的影响，探讨其促进骨质疏松性骨折愈合的细胞/分子作用机制。
方法3个月龄SD大鼠，行双侧卵巢切除术，术后常规喂养，术后6个月用显微CT(Micro-CT)行骨密度检测，确定骨质疏松模型建立成功；处死骨质疏松大鼠，采用全血贴壁法分离BMSCs，用流式细胞仪进行鉴定；以培养基中加入不同浓度(10－7～10－10 mol/L)的CGRP建立实验组，用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力；碱性磷酸酶(ALP)活性检测及茜素红染色法观察CGRP对骨质疏松大鼠BMSCs成骨分化及细胞外基质矿化能力的影响；采用反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ALP、Ⅰ型胶原蛋白(COLL-1)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨粘连蛋白(Osteonectin)、Run家族转录因子(RunX2)等成骨相关细胞基因mRNA的表达；使用Western blot分析来检测RunX2及Osteonectin的蛋白含量。
结果成功分离培养出骨质疏松大鼠BMSCs；CCK-8法测定细胞增殖能力，CGRP各浓度组较对照组均增加，且呈剂量依赖关系，7 d时对照组吸光度(A)值为0.580 4±0.015 0，CGRP组中10－7 mol/L为0.804 1±0.029 9(P＝0.000)，10－8 mol/L为0.788 6±0.028 0(P＝0.000)，10－9 mol/L为0.743 6±0.028 8(P＝0.001)，10－10 mol/L为0.693 3±0.029 2(P＝0.004)，差异有统计学意义；ALP活性测定结果显示，各CGRP组较对照组ALP活性均增高，14 d时对照组为4.633±0.423，CGRP组中10－7 mol/L为44.047±2.446(P＝0.000)，10－8 mol/L为42.030±2.626(P＝0.000)，10－9 mol/L为39.333±0.527(P＝0.000)，10－10 mol/L为24.647±1.135(P＝0.000)[单位：10－3 μmol/(min·mg)]，差异有统计学意义；钙结节染色均呈阳性，而对照组无显色；基因检测结果提示，各CGRP组的基因表达较对照组升高，7 d时ALP空白组为0.999 5±0.205 0，10－7 mol/L为2.578 4±0.210 1(P＝0.001)，10－10 mol/L为2.351 2±0.201 2(P＝0.001)；BMP-2空白组为0.979 5±0.200 1，10－7 mol/L为3.427 9±0.255 2(P＝0.000)，10－10 mol/L为2.914 9±0.202 3(P＝0.000)；COLL-I空白组为1.029 5±0.202 2，10－7 mol/L为2.518 7±0.240 0(P＝0.001)，10－10 mol/L为2.347 8±0.201 4(P＝0.001)；RunX2空白组为0.993 2±0.213 2，10－7 mol/L为2.498 9±0.262 0(P＝0.002)，10－10 mol/L为2.219 8±0.250 3(P＝0.003)；Osteonectin空白组为1.019 5±0.200 1，10－7 mol/L为1.972 8±0.212 3(P＝0.005)，10－10 mol/L为1.864 2±0.250 1(P＝0.010)，差异有统计学意义；蛋白检测结果提示各CGRP组的RunX2及Osteonectin蛋白表达较对照组均升高。
结论适当浓度(10－7～10－10 mol/L)的CGRP可以促进骨质疏松大鼠BMSCs的增殖，呈浓度依赖性，同时可提高其成骨分化能力，CGRP可能在治疗骨质疏松骨折的骨修复中发挥重要作用。