【摘 要】
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目的:通过构建抗TNF-αFab重组表达质粒,在大肠杆菌周质空间中高效可溶性表达抗TNF-α Fab,经工艺优化以提高目的蛋白的产率。方法:菌体经发酵罐发酵后,使用萃取方法进行周质
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院,北京三元基因药业股份有限公司,
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目的:通过构建抗TNF-αFab重组表达质粒,在大肠杆菌周质空间中高效可溶性表达抗TNF-α Fab,经工艺优化以提高目的蛋白的产率。方法:菌体经发酵罐发酵后,使用萃取方法进行周质空间可溶性目的蛋白的萃取并通过试验设计(DOE)优化萃取工艺,采用Q Sepharose Fast Flow强碱性阴离子交换柱净化,Phenyl Sepharose Fast Flow疏水柱及Protein L亲和柱纯化。结果:经DOE筛选得到了相对最优的萃取条件,该纯化方法得到的目的蛋白的体积产率可达23.5mg/L,纯度大于90%,回收率大于24%,且离子交换柱净化过程有效地保护了亲和柱,提高了亲和柱的使用寿命。抗体亲和力检测证明抗TNF-α Fab具有良好的生物学活性。结论:通过萃取工艺及纯化方法的优化,为抗TNF-α Fab的进一步工艺放大及目的蛋白的性质研究奠定了基础。
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