【摘 要】
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目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法.方法:诱导表达、纯化包涵体
【机 构】
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江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学系
【基金项目】
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江苏大学大学生科研立项基金;国家自然科学基金
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目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法.方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力.结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力.结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率.
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