【摘 要】
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为了解军曹鱼NHE3与NKAα1a的序列特征、盐度胁迫下的基因表达模式以及相关miRNA的靶向调控作用，实验应用cDNA末端快速扩增技术克隆了NHE3与NKAα1a的全长cDNA序列；应用实时定量PCR（qPCR）技术分析了NHE3和NKAα1a的组织特异性和盐度适应性表达模式；采用双荧光素酶报告实验检测了NHE3和NKAα1a与相关miRNA的靶向调控关系。结果显示，军曹鱼NHE3与NKAα1a
【基金项目】
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国家级大学生创新创业训练计划项目（CXXL2020002）； 2021年度广东省普通高校特色创新类项目（2021KTSCX044）； 广东海洋大学2019年“冲一流”省财政专项资金建设项目； 广东海洋大学“南海学者计划”（2017年度）； 广东海洋
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为了解军曹鱼NHE3与NKAα1a的序列特征、盐度胁迫下的基因表达模式以及相关miRNA的靶向调控作用，实验应用cDNA末端快速扩增技术克隆了NHE3与NKAα1a的全长cDNA序列；应用实时定量PCR（qPCR）技术分析了NHE3和NKAα1a的组织特异性和盐度适应性表达模式；采用双荧光素酶报告实验检测了NHE3和NKAα1a与相关miRNA的靶向调控关系。结果显示，军曹鱼NHE3与NKAα1a基因的开放阅读框长度分别为2 718、3 075 bp，分别编码905、1 024个氨基酸；NHE3、NKAα1a在鳃、肠、心脏等9种组织中均有表达，其中以鳃组织中的表达丰度最高。随着盐度升高，NHE3在鳃中表达量下降，低盐和高盐适应后均呈显著性差异。NKAα1a基因表达量随着盐度升高出现不同趋势，在鳃和肠中受低盐和高盐影响后均显著上调，而高盐环境下其在体肾中的表达水平显著下调。在不同盐度适应过程中，NHE3、NKAα1a均以鳃组织中的表达水平最高。NHE3-pmirGLO-WT与miR-1335-3p共转染时，较对照组相对荧光素酶活性下降，并存在极显著差异；NKAα1a-pmirGLO-WT分别与miR-1788-3p和mimic NC（对照组）的共转染结果与上述结果类似；研究结果提示，miR-1335-3p和miR-1788-3p可分别与NHE3和NKAα1a 3′-UTR序列结合，并下调其mRNA表达水平。NHE3和NKAα1a在物种间高度保守；NHE3主要参与低盐适应，而NKAα1a在低盐和高盐适应中均发挥作用；miR-1335-3p和miR-1788-3p可分别负向调控其靶基因NHE3与NKAα1a，从而参与军曹鱼渗透压调节。以上研究结果为进一步研究军曹鱼miRNA-mRNA渗透压调控网络提供了理论基础。
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