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摘要：目的 改进气血双补口服液的质量标准，为制剂质量提供保障。方法 采用高效液相色谱法同时测定制剂中芍药苷和淫羊藿苷的含量。色谱柱为Agiltnt TC-C18（2）柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1% 磷酸梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为25 ℃，检测波长为232 nm。结果 芍药苷、淫羊藿苷分别在0.542～8.677 μg（r=0.999 9）、0.185～2.963 μg（r=0.999 9）范围内有良好的线性关系，平均回收率分别为99.29%、98.91%，RSD分别为1.06%、1.97%（n=6）。结论 该方法准确易行，便于该制剂的质量控制。
关键词：气血双补口服液；芍药苷；淫羊藿苷；高效液相色谱法；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.08.022
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）08-0080-03
Content Determination of Paeoniflorin and Icariin in Qixue Shuangbu Oral Liquid by HPLC REN Hai-xiang， QIAO Li-ye， HUANG Lu， JIA Jia， LU Yin， SU Hua （Department of Preparation Division， Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command of PLA， Nanjing 210002， China）
Abstract：Objective To improve the quality standard of Qixue Shuangbu Oral Liquid；To provide guarantee for the quality of oral liquids. Methods HPLC was used to simultaneously determine the contents of paeoniflorin and icariin in the oral liquid. The determination was performed on a Agiltnt TC-C18 （2） column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm） with the mobile phase of acetonitrile and 0.1% H3PO4 gradient mode. The flow rate was 1.0 mL/min；the column temperature was set at 25 ℃； the detection wavelength was 232 nm. Results The linear ranges of paeoniflorin and icariin were obtained between 0.542-8.677 μg （r=0.999 9） and 0.185-2.963 μg （r=0.999 9）， with the average recoveries （n=6） of 99.29% （RSD=1.06%） and 98.91% （RSD=1.97%）， respectively. Conclusion This method is accurate and feasible， which can be used conveniently in quality control of Qixue Shuangbu Oral Liquid.
Key words：Qixue Shuangbu Oral Liquid；paeoniflorin；icariin；HPLC；content determination
基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题面上项目（13ZJZ15-2）
通讯作者：苏华，E-mail：suhuash@sina.com
的转录。我们认为丙肝合剂可能改变细胞内环境，使重组体HCV复制子不能利用Huh7.5.1细胞中的合成酶和蛋白因子进行HCV结构基因的基因转录。
参考文献：
[1] 中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南[J].中华传染病杂志，2004，22（2）：131-136.
[2] 王成宝，聂红明，李弘町.慢性丙型肝炎的中医学研究进展[J].辽宁中医杂志，2011，38（4）：795-797.
[3] 曹静静，薛博瑜.中医药治疗丙型肝炎的研究[J].长春中医药大学学报，2012，28（1）：71-73.
[4] 李京涛，常占杰，席奇，等.HCV细胞培养系统及其在中草药提取物抗HCV研究中的应用[J].临床肝胆病杂志，2015，31（1）：115-117.
[5] 常占杰，李京涛.益气养肝方联合干扰素和利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的疗效观察[J].中国肝脏病杂志，2009，1（2）：24-27.
[6] 李京涛，周斌，周元平，等.华南HCV 1b亚型NS5A插入式复制子重组质粒的构建和序列分析[J].南方医科大学学报，2012，32（1）：46-49.
（收稿日期：2015-01-15）
（修回日期：2015-01-25；编辑：华强）
气血双补口服液是本院特色制剂[南制字（2011） F01016]，功效益气养血、温肾填精，用于头晕目眩、少气懒言、倦怠、乏力、面色萎黄、心悸失眠、手足发麻等气血虚弱症状，亦可用于再生障碍性贫血、血小板减少性紫癜及肿瘤化疗、放疗造成的白细胞、血小板下降的治疗。该制剂经多年临床使用，疗效确切，但目前其质量控制研究多是对制剂中的单成分进行高效液相色谱法（HPLC）测定，不便于保证制剂的质量[1-2]。本研究对该制剂中的白芍和淫羊藿同时进行HPLC分析，通过简化分析过程，以期改进其质量控制标准。 1 仪器与试药
Agilent1260型高效液相色谱仪（四元泵、DAD紫外检测器），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），AE240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），FA1604S电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。
芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号110736-200732，纯度98.1%），淫羊藿苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号110737-200415），气血双补口服液（本院制剂科制备，批号140612、140424、140705），磷酸、甲醇、纯化水均为色谱级。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm）；流动相A为0.1%磷酸、B为乙腈，梯度洗脱（0～25 min， 88%A；25～26 min，88%～68%A；26～36 min，68% A； 36.1 min，88%A；40 min，88%A）；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：232 nm；柱温：25 ℃。芍药苷的保留时间约为26 min，淫羊藿苷的保留时间约为37 min。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品13.82 mg、淫羊藿苷对照品4.63 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。精密量取对照品储备液2 mL，置10 mL量瓶中，加流动相定容，作为混合对照品溶液，芍药苷、淫羊藿苷浓度分别为108.46、37.04 μg/mL。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取本品5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例和供试品制备工艺制成不加白芍和淫羊藿的阴性样品，按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.5 专属性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各20 μL，在“2.1”项色谱条件下进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间处，有同一色谱峰，而阴性对照溶液在相应保留时间处则无峰出现，表明其对样品测定无干扰。色谱图见图1。
2.6 线性关系考察
分别精密量取“2.2”项下对照品储备液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别进样测定，记录色谱图，以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归。芍药苷回归方程：A=16.363C-22.166，r2=0.999 9（n=5）；淫羊藿苷回归方程：A=30.461C-8.541 6，r2=0.999 9（n=5）。表明芍药苷进样量在0.542～8.677 μg范围内，淫羊藿苷进样量在0.185～2.963 μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验
取“2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，结果芍药苷峰面积RSD=0.58%、淫羊藿苷峰面积RSD=1.09%。表明本方法精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一批号（批号140612）样品5份，按“2.3”项下方法制备并测定，结果芍药苷峰面积RSD=2.71%、淫羊藿苷峰面积RSD=2.26%。表明本方法重复性良好。
2.9 稳定性试验
取同一批号（批号140612）供试品溶液，在常温下分别于0、1、2、4、8 h进样测定，结果芍药苷峰面积RSD=1.10%、淫羊藿苷峰面积RSD=0.93%。表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.10 加样回收率试验
精密吸取已知含量（批号140612）的样品2.5 mL，共 6份，分别置于10 mL量瓶中，分别精密加入储备液1 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液各20 μL注入色谱仪，测定含量，计算回收率，结果见表1、表2。
2.11 样品含量测定
取3批气血双补口服液，按“2.2”“2.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表3。
3 讨论
样品中芍药苷的最大吸收波长为232 nm，淫羊藿苷的最大吸收波长为270 nm，二者分别在223 nm和247 nm处有共同吸收，且吸收值在223 nm大于247 nm处，但接近末端吸收，故采用232 nm为二者的检测波长较为合适[3]。
文献中芍药苷流动相为0.1%磷酸-甲醇（71∶29），淫羊藿苷流动相为水-乙腈（73∶27）[4-6]，2种成分的流动相类似，因乙腈吸光度较甲醇小，分析中产生的干扰更少，故尝试乙腈-磷酸系统进行梯度洗脱。
供试品原采用乙醚和正丁醇萃取的方法，提取过程略显繁琐，笔者多次试验后确定了合适的梯度洗脱方法，并在保证分离度的同时简化了提取过程。
参考文献：
[1] 王曙东，苏振乾，汤昊，等.急支平喘软胶囊的质量标准研究[J].医学研究生学报，2012，25（4）：395-398.
[2] 汤昊，唐安福，崔恩忠，等.气血双补口服液的质量标准研究[J].中华中医药学刊，2014，32（8）：1861-1863.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：96-97，306-307.
[4] 唐安福，崔恩忠，汤昊.气血双补口服液的提取工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（8）：51-54.
[5] 李越峰，吴平安，王瑞琼.RP-HPLC同时测定四逆散中4种有效成分含量[J].中国中医药信息杂志，2014，21（7）：74-77.
[6] 闫寒，聂颖兰，郭娜.HPLC测定凉血解毒胶囊中芍药苷含量[J].中国中医药信息杂志，2013，20（3）：60-61.
（收稿日期：2014-12-31）
（修回日期：2015-01-21；编辑：陈静）
关键词：气血双补口服液；芍药苷；淫羊藿苷；高效液相色谱法；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.08.022
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）08-0080-03
Content Determination of Paeoniflorin and Icariin in Qixue Shuangbu Oral Liquid by HPLC REN Hai-xiang， QIAO Li-ye， HUANG Lu， JIA Jia， LU Yin， SU Hua （Department of Preparation Division， Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command of PLA， Nanjing 210002， China）
Abstract：Objective To improve the quality standard of Qixue Shuangbu Oral Liquid；To provide guarantee for the quality of oral liquids. Methods HPLC was used to simultaneously determine the contents of paeoniflorin and icariin in the oral liquid. The determination was performed on a Agiltnt TC-C18 （2） column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm） with the mobile phase of acetonitrile and 0.1% H3PO4 gradient mode. The flow rate was 1.0 mL/min；the column temperature was set at 25 ℃； the detection wavelength was 232 nm. Results The linear ranges of paeoniflorin and icariin were obtained between 0.542-8.677 μg （r=0.999 9） and 0.185-2.963 μg （r=0.999 9）， with the average recoveries （n=6） of 99.29% （RSD=1.06%） and 98.91% （RSD=1.97%）， respectively. Conclusion This method is accurate and feasible， which can be used conveniently in quality control of Qixue Shuangbu Oral Liquid.
Key words：Qixue Shuangbu Oral Liquid；paeoniflorin；icariin；HPLC；content determination
基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题面上项目（13ZJZ15-2）
通讯作者：苏华，E-mail：suhuash@sina.com
的转录。我们认为丙肝合剂可能改变细胞内环境，使重组体HCV复制子不能利用Huh7.5.1细胞中的合成酶和蛋白因子进行HCV结构基因的基因转录。
参考文献：
[1] 中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南[J].中华传染病杂志，2004，22（2）：131-136.
[2] 王成宝，聂红明，李弘町.慢性丙型肝炎的中医学研究进展[J].辽宁中医杂志，2011，38（4）：795-797.
[3] 曹静静，薛博瑜.中医药治疗丙型肝炎的研究[J].长春中医药大学学报，2012，28（1）：71-73.
[4] 李京涛，常占杰，席奇，等.HCV细胞培养系统及其在中草药提取物抗HCV研究中的应用[J].临床肝胆病杂志，2015，31（1）：115-117.
[5] 常占杰，李京涛.益气养肝方联合干扰素和利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的疗效观察[J].中国肝脏病杂志，2009，1（2）：24-27.
[6] 李京涛，周斌，周元平，等.华南HCV 1b亚型NS5A插入式复制子重组质粒的构建和序列分析[J].南方医科大学学报，2012，32（1）：46-49.
（收稿日期：2015-01-15）
（修回日期：2015-01-25；编辑：华强）
气血双补口服液是本院特色制剂[南制字（2011） F01016]，功效益气养血、温肾填精，用于头晕目眩、少气懒言、倦怠、乏力、面色萎黄、心悸失眠、手足发麻等气血虚弱症状，亦可用于再生障碍性贫血、血小板减少性紫癜及肿瘤化疗、放疗造成的白细胞、血小板下降的治疗。该制剂经多年临床使用，疗效确切，但目前其质量控制研究多是对制剂中的单成分进行高效液相色谱法（HPLC）测定，不便于保证制剂的质量[1-2]。本研究对该制剂中的白芍和淫羊藿同时进行HPLC分析，通过简化分析过程，以期改进其质量控制标准。 1 仪器与试药
Agilent1260型高效液相色谱仪（四元泵、DAD紫外检测器），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），AE240电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），FA1604S电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。
芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号110736-200732，纯度98.1%），淫羊藿苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号110737-200415），气血双补口服液（本院制剂科制备，批号140612、140424、140705），磷酸、甲醇、纯化水均为色谱级。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm）；流动相A为0.1%磷酸、B为乙腈，梯度洗脱（0～25 min， 88%A；25～26 min，88%～68%A；26～36 min，68% A； 36.1 min，88%A；40 min，88%A）；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：232 nm；柱温：25 ℃。芍药苷的保留时间约为26 min，淫羊藿苷的保留时间约为37 min。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品13.82 mg、淫羊藿苷对照品4.63 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。精密量取对照品储备液2 mL，置10 mL量瓶中，加流动相定容，作为混合对照品溶液，芍药苷、淫羊藿苷浓度分别为108.46、37.04 μg/mL。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取本品5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例和供试品制备工艺制成不加白芍和淫羊藿的阴性样品，按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.5 专属性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各20 μL，在“2.1”项色谱条件下进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间处，有同一色谱峰，而阴性对照溶液在相应保留时间处则无峰出现，表明其对样品测定无干扰。色谱图见图1。
2.6 线性关系考察
分别精密量取“2.2”项下对照品储备液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别进样测定，记录色谱图，以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归。芍药苷回归方程：A=16.363C-22.166，r2=0.999 9（n=5）；淫羊藿苷回归方程：A=30.461C-8.541 6，r2=0.999 9（n=5）。表明芍药苷进样量在0.542～8.677 μg范围内，淫羊藿苷进样量在0.185～2.963 μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验
取“2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，结果芍药苷峰面积RSD=0.58%、淫羊藿苷峰面积RSD=1.09%。表明本方法精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一批号（批号140612）样品5份，按“2.3”项下方法制备并测定，结果芍药苷峰面积RSD=2.71%、淫羊藿苷峰面积RSD=2.26%。表明本方法重复性良好。
2.9 稳定性试验
取同一批号（批号140612）供试品溶液，在常温下分别于0、1、2、4、8 h进样测定，结果芍药苷峰面积RSD=1.10%、淫羊藿苷峰面积RSD=0.93%。表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.10 加样回收率试验
精密吸取已知含量（批号140612）的样品2.5 mL，共 6份，分别置于10 mL量瓶中，分别精密加入储备液1 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液各20 μL注入色谱仪，测定含量，计算回收率，结果见表1、表2。
2.11 样品含量测定
取3批气血双补口服液，按“2.2”“2.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表3。
3 讨论
样品中芍药苷的最大吸收波长为232 nm，淫羊藿苷的最大吸收波长为270 nm，二者分别在223 nm和247 nm处有共同吸收，且吸收值在223 nm大于247 nm处，但接近末端吸收，故采用232 nm为二者的检测波长较为合适[3]。
文献中芍药苷流动相为0.1%磷酸-甲醇（71∶29），淫羊藿苷流动相为水-乙腈（73∶27）[4-6]，2种成分的流动相类似，因乙腈吸光度较甲醇小，分析中产生的干扰更少，故尝试乙腈-磷酸系统进行梯度洗脱。
供试品原采用乙醚和正丁醇萃取的方法，提取过程略显繁琐，笔者多次试验后确定了合适的梯度洗脱方法，并在保证分离度的同时简化了提取过程。
参考文献：
[1] 王曙东，苏振乾，汤昊，等.急支平喘软胶囊的质量标准研究[J].医学研究生学报，2012，25（4）：395-398.
[2] 汤昊，唐安福，崔恩忠，等.气血双补口服液的质量标准研究[J].中华中医药学刊，2014，32（8）：1861-1863.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：96-97，306-307.
[4] 唐安福，崔恩忠，汤昊.气血双补口服液的提取工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（8）：51-54.
[5] 李越峰，吴平安，王瑞琼.RP-HPLC同时测定四逆散中4种有效成分含量[J].中国中医药信息杂志，2014，21（7）：74-77.
[6] 闫寒，聂颖兰，郭娜.HPLC测定凉血解毒胶囊中芍药苷含量[J].中国中医药信息杂志，2013，20（3）：60-61.
（收稿日期：2014-12-31）
（修回日期：2015-01-21；编辑：陈静）