丙型肝炎病毒聚合酶链反应直接序列分析方法的建立及应用(英文)

来源 :China National Journal of New Gastroenterology | 被引量 : 0次 | 上传用户:waxizhaojing
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目的探讨快速完成丙型肝炎病毒cDNA(HCVcDNA)序列分析的方法.方法将聚合酶链反应(PCR)扩增与核酸序列分析技术相结合,以PCR产物为测序模板,以r32PATP标记PCR扩增引物为测序引物,用taqDNA聚合酶直接测序.结果以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳回收PCR产物制备测序模板可获得最佳测序效果.在需要测定大量标本时,为进一步简化操作步骤,可降低套式PCR中第一次扩增反应的dNTP与引物浓度,以第一次PCR扩增产物为模板,也可得到较好的测序结果。PEG沉淀回收法不能去除非特异性PCR产物,对PC
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