【摘 要】
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[目的] 克隆表达和纯化野生型及 3种缺失突变型人 PDIP38 谷胱甘肽 S 转移酶( glutathion S transferase,GST)融合蛋白.[方法]采用常规 PCR扩增法得到野生型及 3种缺失突变型
【机 构】
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中山大学中山医学院生化教研室,纽约医学院生物化学与分子生物学系,广东医学院生化教研室
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[目的] 克隆表达和纯化野生型及 3种缺失突变型人 PDIP38 谷胱甘肽 S 转移酶( glutathion S transferase,GST)融合蛋白.[方法]采用常规 PCR扩增法得到野生型及 3种缺失突变型人 PDIP38的 cDNA; 4种 cDNA与 GST融合载体 pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌 DH5α;采用 BamHⅠ和 XhoⅠ双酶切鉴定插入的 DNA序列;采用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白.[结果] 野生型和 3种缺失突变型人 PDIP38 GST融合蛋白在 DH5α中高效表达;经谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化后, 4种蛋白的纯度均达到 85%以上.[结论] pGEX-4T-1 GST蛋白融合载体可高效表达人 PDIP38蛋白;用谷胱甘肽-sepharose 4B亲和层析柱一步纯化法可简单、快速地得到高纯度的蛋白.
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