【摘 要】
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目的:探究羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC增殖、周期及凋亡的影响。方法:PCR法扩增CPE基因片段,将其插入表
【机 构】
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南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科; 南京医科大学病原微生物学系;
【基金项目】
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江苏省卫生健康委员会课题(H201458);淮安市533英才工程科研项目资助计划(HAA201744)
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目的:探究羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC增殖、周期及凋亡的影响。方法:PCR法扩增CPE基因片段,将其插入表达载体pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1-CPE。将质粒转染GMC细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测CPE标签蛋白、增殖标志物细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及凋亡标记物Cleaved-caspase-3的表达;采用平板克隆、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法以及流式分析法检测过表达CPE对高糖培养的GMC细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果:成功构建CPE过表达的GMC细胞。平板克隆以及CCK-8实验表明,过表达CPE可以抑制GMC细胞的增殖能力。流式细胞学检测表明,与对照组相比,CPE过表达明显促进了细胞凋亡;细胞周期中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义(P <0.01)。结论:过表达CPE可以抑制高糖培养的小鼠GMC细胞增殖并诱导细胞凋亡。
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