人Polo样激酶1活性缺失突变体和结构域在293细胞中的瞬时表达

来源 :生物技术通讯 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nickymin
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目的:构建人Polo样激酶1(Plk1)活性缺失突变体及结构域突变体的真核表达载体,并在293细胞中表达。方法:用二次PCR方法扩增Plk1基因并点突变,将82位赖氨酸突变为精氨酸,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中;用普通PCR方法扩增Plk1激酶区域及Polo盒区域(PBD)基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中;将上述质粒转染293细胞进行瞬时表达,Western印迹检测Plk1蛋白的表达。结果:构建了Flag—Plk1(K82R)、Flag—Plk1KD、Flag—Plk1PBD真核表达
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