【摘 要】
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目的：探讨铜-二乙酰-2（N~4-甲基氨基硫脲）（Cu-ATSM）对糖氧剥夺再灌注（OGD/R）后人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用及其潜在机制。方法：将体外培养的HUVECs分为Control组、OGD/R组、OGD/R+Cu-ATSM组；采用流式细胞术检测HUVECs的凋亡情况；采用Mito-tracker染色检测线粒体形态；JC-1染色分析各组线粒体膜电位的变化；采用蛋白质印迹法（W
【机 构】
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温州医科大学附属第二医院育英儿童医院急诊医学科
【基金项目】
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浙江省自然科学基金项目（LQ22H150004）； 温州市重大科技创新攻关项目（ZY2021024）；
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目的：探讨铜-二乙酰-2（N~4-甲基氨基硫脲）（Cu-ATSM）对糖氧剥夺再灌注（OGD/R）后人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用及其潜在机制。方法：将体外培养的HUVECs分为Control组、OGD/R组、OGD/R+Cu-ATSM组；采用流式细胞术检测HUVECs的凋亡情况；采用Mito-tracker染色检测线粒体形态；JC-1染色分析各组线粒体膜电位的变化；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测各组自噬相关蛋白如ATG5、Beclin1、LC3Ⅰ/Ⅱ的激活情况；采用免疫荧光检测各组细胞LC3Ⅱ的表达情况。结果：流式细胞术结果显示，与Control组比，OGD/R损伤后HUVECs凋亡数目显著上升，而当Cu-ATSM治疗后，凋亡的HUVECs显著减少（均P＜0.05）。Mito-tracker及JC-1染色结果显示，与Control组比，OGD/R组损伤后线粒体的形态明显受到损伤，线粒体功能受损，膜电位下降，而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后能够改善损伤的线粒体功能，维持线粒体形态和线粒体膜电位（均P＜0.05）。Western blot结果显示，与Control组比，OGD/R组损伤后自噬相关信号通路如ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达量增多，而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后的自噬相关蛋白表达量较OGD/R组下降（均P＜0.05）。免疫荧光结果显示，与Control组比，OGD/R组损伤后LC3Ⅱ的表达显著增多，而OGD/R+Cu-ATSM治疗后的LC3Ⅱ显著减少。结论：Cu-ATSM能够改善HUVECs OGD/R损伤后的线粒体功能，减少HUVECs凋亡，其机制可能是通过抑制自噬实现的。
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