【摘 要】
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目的利用体外人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）实验研究核转录因子-κB（NF-κB）参与感染诱导诱骗受体3（DcR3）表达升高的信号转导机制。方法针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖（LPS）0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸（LTA）5、50、500 ng/mL和酵母聚糖（zymosan）10、100、1 000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组:LPS
【基金项目】
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上海市卫生健康委员会面上项目（201940025）；
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目的利用体外人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）实验研究核转录因子-κB（NF-κB）参与感染诱导诱骗受体3（DcR3）表达升高的信号转导机制。方法针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖（LPS）0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸（LTA）5、50、500 ng/mL和酵母聚糖（zymosan）10、100、1 000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组:LPS组、LTA组、zymosan组和正常对照组（未经过LPS、LTA和zymosan刺激的HUVEC）。流式细胞术检测细胞表面Toll样受体2（TLR2）和TLR4的表达,采用特异性抑制剂阻断NF-κB和MAPK信号通路后,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中DcR3的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）法检测细胞内DcR3 mRNA表达水平,Western-blot法检测细胞内DcR3蛋白的表达。结果流式细胞术检测HUVEC细胞表面TLR2和TLR4的表达分别为（82.23%±2.15%）和（77.87%±1.06%）。以低、中、高3个浓度刺激HUVEC细胞后,与对照组相比,低浓度组上清液中DcR3水平无明显升高;中、高浓度组DcR3水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义（均P<0.05）;高浓度组DcR3水平比中浓度组明显增高,差异有统计意义（均P<0.05）;随着时间延长,高浓度刺激后的HUVEC细胞上清液中DcR3的表达与对照组相比明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。正常对照组、高浓度LPS组、高浓度LTA组以及高浓度zymosan组细胞内DcR3 mRNA的相对表达水平分别为（1.00±0.05）、（2.28±0.26）、（1.98±0.30）、（2.10±0.16）。3种刺激物组的DcR3 mRNA和DcR3蛋白表达明显升高,与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.01）。刺激12 h后,细胞内DcR3 mRNA的表达即明显升高,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。加入NF-κB抑制剂PDTC后,细胞上清液以及细胞内DcR3表达较未加抑制剂组明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,而加入P38 MAPK抑制剂U0126和PD9859后,细胞上清液及细胞内DcR3的表达无明显影响。结论 LPS、LTA以及zymosan通过激活NF-κB信号通路诱导HUVEC表达DcR3。
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