【摘 要】
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目的 构建人MEKK3基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对肺腺癌细胞增殖的影响.方法 从A549细胞中提取总RNA,应用RT-PCR扩增MEKK3 cDNA的全
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目的 构建人MEKK3基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对肺腺癌细胞增殖的影响.方法 从A549细胞中提取总RNA,应用RT-PCR扩增MEKK3 cDNA的全长序列后克隆入pcDNA3.1/hygro(+)质粒中,构建成MEKK3基因的真核表达载体,然后转染入人肺腺癌A549细胞中,潮霉素筛选稳定转染克隆,通过MTT实验,研究转染MEKK3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误,Western印迹检测结果显示MEKK3基因在A549细胞中具有良好的表达;荧光实时定量PCR结果表明MEKK3基因在其稳定转染的A549细胞克隆中表达上调,与空载体稳定转染及未转染细胞比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);MTT结果显示MEKK3表达上调的稳定克隆组,A549细胞的增殖活性显著增强(A570=0.876 1±0.074 5),明显高于空载体稳定转染组(A570=0.582 8±0.070 3)及未转染亲代细胞组(A570=0.584 9±0.035 2),差异具有统计学意义(P＜0.01),而后两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MEKK3表达上调可导致肺腺癌细胞的增殖增强.
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