一种新型抗HIV-1药物筛选方法的建立

来源 :中华临床感染病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:christian1985
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目的 

用细胞共培养和流式细胞仪检测建立新型抗HIV-1药物筛选方法,并判断这种方法在筛选抗HIV-1药物中的应用前景。

方法

把JLTRG细胞和H9/HTLV-ⅢB细胞按照不同比例共培养24,48,72和96 h。在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光强度和密度,同时用流式细胞仪测定绿色荧光的表达,并确定培养体系中最佳细胞比例和培养时间。通过选出的最佳条件结合药物半衰期检测恩夫韦肽(T20)和依非韦伦(EFV)的有效性及药物半数抑制量(IC50)。采用HIV-1 P24抗原荧光定量PCR法检测病毒载量,并采用Spearman秩相关性分析法判断其与药物浓度及平均荧光强度之间的相关性。

结果

实验结果显示,JLTRG细胞与H9/HTLV-ⅢB细胞按照10∶1的细胞数量比例共培养72 h为最佳培养比例和时间。以T20和EFV对共培养体系进行验证,结果显示随着T20和EFV浓度的改变,共培养体系中JLTRG细胞感染HIV-1的程度不同,其IC50分别为10 nmol/L和5 nmol/L。T20和EFV药物浓度与平均荧光强度以及病毒载量呈负相关(r=-1,-0.986和-1,-1,P<0.01);平均荧光强度与病毒载量呈正相关(r=0.986和1,P<0.01)。

结论

本研究建立的新型抗HIV-1药物筛选方法具有耗时短、操作方便等优点,可为抗HIV-1药物的筛选提供新的选择。

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