【摘 要】
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为探究芦笋(Asparagus officinalis)性别分化基因Ao TDF1在花发育中的表达模式与分子功能,本研究以四倍体'紫色激情'两性株自交后代中雌、雄和两性株为材料,RT-PCR分别扩增Ao
【机 构】
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云南农业大学农学与生物技术学院,昆明650201;云南农业大学农学与生物技术学院,昆明650201;云南农业大学特色小宗作物研究中心,昆明650201;云南农业大学农学与生物技术学院,昆明650201
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为探究芦笋(Asparagus officinalis)性别分化基因Ao TDF1在花发育中的表达模式与分子功能,本研究以四倍体'紫色激情'两性株自交后代中雌、雄和两性株为材料,RT-PCR分别扩增AoTDF1的全长CDS(AoTDF1-P)序列及与拟南芥绒毡层发育调控AtAMS同源基因的全长CDS (AoAMS-P)序列,构建基于黄色荧光蛋白(venus)的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)原核表达载体,进行蛋白间互作检测;同时用RNA原位杂交法检测AoTDF1-P在花发育早期的时、空特异性表达.结果 显示:Ao TDF1-P在雄花和两性花的无性别分化早期(T1)的雌蕊、雄蕊和花冠中均有较高表达,在具性别分化早期(T2)降低表达;而在性别分化后期(T3)两性花的花药绒毡层中专一地表达,雄花无表达专一性,但表达量进一步降低;而在T1、T2、T3期的雌花中Ao TDF1-P均无表达.共聚焦显微观测到AoTDF1-P与AoAMS-P间产生较强的黄色荧光,且AoTDF1-P和AoAMS-P自身均产生较弱的黄色荧光,预示AoTDF 1-P、AoAMS-P自身可形成同型聚体,相互间能形成异型聚体调控复合物,专一性地在芦笋雄花或两性花中通过调控下游基因的表达而促进雄性发育.研究为阐明AoTDF1分子机制奠定了基础.
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