【摘 要】
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目的 探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）中内质网应激（ERs）诱导的铁死亡机制。方法 为了确定LPS对小鼠毛细血管肺泡上皮细胞（MLE12细胞）氧化应激和Fe2+水平的影响,用LPS（0、1、2、5μg/ml）处理细胞24 h。将MLE12细胞分为对照（Con）组、脱铁抑制剂（Fer-1）组、LPS组和LPS+Fer-1组以验证铁死亡在脂多糖（LPS）诱导的细胞死亡中的作用。LPS+Fer-1组用
【基金项目】
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湖南省自然科学基金项目（编号:2021JJ70322）；
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目的 探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）中内质网应激（ERs）诱导的铁死亡机制。方法 为了确定LPS对小鼠毛细血管肺泡上皮细胞（MLE12细胞）氧化应激和Fe2+水平的影响,用LPS（0、1、2、5μg/ml）处理细胞24 h。将MLE12细胞分为对照（Con）组、脱铁抑制剂（Fer-1）组、LPS组和LPS+Fer-1组以验证铁死亡在脂多糖（LPS）诱导的细胞死亡中的作用。LPS+Fer-1组用10μmol/L Fer-1预处理6 h,随后将细胞暴露于5μg/ml LPS 24 h;Con组用融媒DMSO处理24 h,Fer-1组用10μmol/L Fer-1预处理6 h,随后用DMSO处理24 h;LPS组将细胞暴露于5μg/ml LPS 24 h。将MLE12细胞分为Con+载体（Vector）组、Con+序列相似性家族134成员B （FAM134B）组、LPS+Vector组、LPS+FAM134B组,细胞用Vector或FAM134B过表达质粒转染48h后,暴露或不暴露于5μg/ml LPS 24 h。使用CCK-8法测定细胞活力;测量不同组的丙二醛（MDA）、谷胱甘肽和铁的水平,以及铁死亡标志物[环加氧酶2（PTGS2）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）]和ERs标志物[葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、活化转录因子4（ATF4）和C/EBP同源蛋白（CHOP）]的蛋白水平;为了进一步证实体外细胞实验结果,将40只小鼠随机分成Con+Vector组、Con+FAM134B组、LPS+Vector组、LPS+FAM134B组,每组10只,在LPS+Vector组、LPS+FAM134B组小鼠中建立LPS诱导的脓毒症模型,并通过免疫荧光染色和蛋白质印迹评估肺组织中GPX4和ERs水平。结果 LPS处理的MLE12细胞中PTGS2和MDA水平以剂量依赖性增加,GPX4和谷胱甘肽（GSH）水平剂量依赖性降低;与LPS组相比,LPS+Fer-1组细胞活力、GPX4和GSH水平增加（P＜0.05）,PTGS2蛋白水平和MDA水平降低（P ＜0.05）;与LPS+Vector组相比,LPS+FAM134B组细胞活力增加（P＜0.05）,MDA水平和PTGS2蛋白水平降低（P ＜0.05）,GPX4和GSH水平增加（P＜0.05）;动物实验中,与LPS+Vector组相比,LPS+FAM134B组小鼠肺组织中4-HNE、ATF4和CHOP表达水平降低（P ＜0.05）,GPX4、FAM134B表达水平增加（P＜0.05）。结论 LPS以剂量依赖的方式诱导MLE12细胞铁死亡和ERs通过激活内质网自噬相关FAM134B受体有助于抑制ERs,并减轻细胞铁死亡。
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