大肠杆菌PGDH末端缺失突变体的构建及抗反馈抑制效应分析

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tim826
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为了获得具有抗反馈抑制性质的大肠杆菌磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH,d-3-phosphoglycerate dehydrogenase,EC 1.1.1.95),通过对其碱基序列和蛋白质结构分析,用PCR突变法构建突变酶M1(缺失第410位氨基酸)、M2(缺失407~410位氨基酸)、M3(缺失337~410位氨基酸).M0(野生型)及各突变型基因与pET22b(+)载体连接后,表达融合蛋白.在非变性条件下,由NTA-Ni镍离子螯合亲和层析柱纯化野生型和突变体的酶蛋白.酶活性测定结果表明,M1、M2蛋白酶均
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