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摘 要：采用 Malvern Mastersizer 2000 型激光粒度分析仪研究微粉化替莫唑胺粒度测定方法。通过筛选分散剂种类、表面活性剂及其浓度，设定仪器参数，筛选样品浓度及进行溶液稳定性研究确定了一种全新的替莫唑胺粒度测定方法。方法的精密度和耐用性验证结果表明本文确定的方法精密度及耐用性好。本法可准确测定微粉化替莫唑胺原料药的粒度。
关键词：替莫唑胺；粒度；光散射法；微粉化
Abstract：A new test method was studied for the determination of particle size of Temozolomide by using Malvern Mastersizer 2000 type laser size analyzer.The method was established by the screening of dispersion agent，surfactant and its concentration，setting the parameters of analyzer，screening of samples concentration，and studying of solution stability.The method was validated for precision and robustness.The method validation results showed that the test method established by this study is precise and robust.The test method can be used to test the particle size of micronized temozolomide accurately.
Key words：Temozolomide；Particle size；Light scattering method；Micronization
替莫唑胺（Temozolomide，1）是一种治疗脑胶质瘤疗效较好的新药，其具有较宽的抗肿瘤谱、可口服、易于透过血脑屏障、安全等优点。1在二甲基亚砜中略溶，在水中微溶，在冰醋酸中微溶，在甲醇中极微溶解，在乙醇中几乎不溶解。[1]
1原料药微粉化后，静电作用增大，采用筛分法容易糊筛，难操作，效率低，不利于产品粒度的测定。因此，本研究旨在通过建立一种全新的，能准确、快速地测定微粉化1粒度的光散射法光散射法湿法测定法。
1 仪器与试药
Malvern Mastersizer 2000型激光粒度分析仪，HYDRO2000MU 型湿法进样器（英国 Malvern 公司）
1（Lunarsun，含量 98%-102%）；山梨糖醇酐三油酸酯（司盘85）为化学纯，正己烷、无水乙醇为分析纯。
2 方法与结果
微粉化后的替莫唑胺，颗粒极细，非常容易产生静电，故采用光散射法濕法测定法。
2.1 方法的确定
2.1.1筛选分散剂
根据1的溶解度，初步选定乙醇为分散剂。实验过程中发现乙醇会逐步溶解1。溶剂的极性会影响药物的溶解度，故根据溶剂的极性大小选定正已烷为分散剂。
将1加入正己烷中，超声，样品粘于烧杯壁底及壁上，且成团块状。因此判定需在正己烷中加入表面活性剂防止粒子聚集。吐温80不能改善样品粘壁。0.1%和0.2%的司盘85—正己烷作为分散剂分散效果无明显差异，最后选定0.1%的司盘85--己烷作为分散剂。
2.1.2设定仪器参数
在用激光粒度仪进行粒度测定时需设定的主要仪器参数有分散介质折射率、样品折射率、样品吸收率。分散介质的折射率可通过文献查得，己烷的折射率为1.372。1的折射率为1.520。样品的吸收率为0.1。[2]
搅拌器转速设定为2000rpm，循环时间设定为2分钟。
2.1.3筛选样品浓度
样品浓度需满足仪器灵敏度要求并使粒子保持单个原始态。湿法测定所需的供试品量通常应达到检测器遮光度范围的8 ～ 20%。[3]
10mg，20mg，30mg，和40mg1，用10ml0.1%的司盘85--己烷分散，超声30秒后检测。样品浓度过小，仪器遮光率达不到8%的要求，样品浓度过大，则仪器遮光度超过20%，仪器提示加入更多的分散剂。最后确定30mg 样品分散到10ml0.1% 司盘85-正己烷为合适的样品浓度
2.1.4溶液稳定性研究
样品配制好后，超声30秒，室温放置5分钟，观察到样品重新粘在烧杯底部及壁上，振摇后样品不能重新分散。配制好的样品，超声30秒后，立即进样，溶液循环测定20分钟，粒度结果变化不明显。所以配制好的样品应立即进样，样品可在系统中稳定循环20分钟。
2.1.5确定的方法
称取1.0+/-0.05克span-85，用正己烷稀释到1000ml（01%）做分散剂。取微粉化的替莫唑胺30mg，放入一盛有10ml分散剂的50ml烧杯中，超声30秒钟。往Hydro SM进样器（小杯进样器）中加入100ml分散剂，搅拌下用滴管将供试液转移入进样器中。循环速度2000rpm，循环2分钟。
2.1.6分析方法验证
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证。[3]根据粒度测定方法的特点，验证了方法的精密度和耐用性。
（1）精密度。精密度通常包括重复性和中间精密度。
（2）重复性。实验员A按照2.1.5章节描述的方法配制六份样品并进行测定。6个样品的d（0.5）RSD应小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD应小于15%。结果见表1。 结论：6个样品的d（0.1），d（0.5），d（0.9）的RSD均小于5%，符合验证标准。
（3）中间精密度。实验员B隔天按照2.1.5章节描述的方法配制六份样品并进行测定。实验员A和B共12个样品的d（0.5）RSD应小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD应小于15%。结果见表2。
结论：12个样品的d（0.5）RSD小于5%，d（0.1）、d（0.9）的RSD小于10%。符合验证标准。产品粒度分布稳定，方法精密度好。
（4）耐用性。影响光散射法测定的实验条件有：样品超声时间，搅拌器转速，样品循环时间。验证时每次只能改变一个条件。验证标准为：改变条件和正常条件下测定结果的d（05）RSD应小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD应小于15%。各条件下的d（0.1），d（0.5），d（0.9）测定结果见下：
超声：20秒：7.515，18.241，39.406；30秒：7.486，18.190，39.185；60秒：6.021，17.005，39.534；RSD（%）：d（0.1）12.2，d（0.5）3.9，d（0.9）0.4。
搅拌器转速：1800 rpm：6.041，17.879，40.803；2000rpm：7486，18.190，39.185；
2500rpm：5.952，17.638，40.575；RSD（%）：d（0.1）13.3，d（0.5）1.5，d（0.9）2.2；
循环时间：1分钟：7.615，18.344，38.530；2分钟：7.593，18.31，38.426；3分钟：7.565，18.267，38.447；RSD（%）：d（0.1）0.3，d（0.5）0.2，d（0.9）0.1；
结论：各验证条件下个样品的d（0.1），d（0.5），d（0.9）RSD符合验证要求。本方法的耐用性好。
3 分析和讨论
采用光散射法湿法测定时，分散剂的种类非常关键，需选择不溶解原料藥的溶剂。溶剂可依据极性药物在非极性溶剂中难溶，非极性药物在极性溶剂中难溶的原理选择。在分散剂中加入良好的表面活性剂有助于达到更好的分散效果，应筛选表面活性剂的浓度以达到更好的分散效果。样品测定时样品配制用分散剂及进样器中的溶剂应保持一致，否则会破坏样品的分散效果，影响测定结果的准确性。样品浓度对测定很关键，以控制仪器遮光度达到8%-20%为宜。超声可使聚集的颗粒分散开，但应观察超声后样品可以放置的合适时间，避免样品放置后重新聚集。
参考文献：
[1]万艳武.替莫唑胺的工艺条件探索与质量控制研究[D].南京：南京大学，2011.
[2]关玉晶，杨波，蒋翠莺.光散射法测定难溶性药物粒度[J].Strait Pharmaceutical Journal，2017，29（7），1-3.
[3]国家药典委员会编.中国药典[S].2015.四部.374-377.
作者简介：米潇（2000-），女，高中生；崔东冬（1973-），男，主要从事药物开发和应用。
关键词：替莫唑胺；粒度；光散射法；微粉化
Abstract：A new test method was studied for the determination of particle size of Temozolomide by using Malvern Mastersizer 2000 type laser size analyzer.The method was established by the screening of dispersion agent，surfactant and its concentration，setting the parameters of analyzer，screening of samples concentration，and studying of solution stability.The method was validated for precision and robustness.The method validation results showed that the test method established by this study is precise and robust.The test method can be used to test the particle size of micronized temozolomide accurately.
Key words：Temozolomide；Particle size；Light scattering method；Micronization
替莫唑胺（Temozolomide，1）是一种治疗脑胶质瘤疗效较好的新药，其具有较宽的抗肿瘤谱、可口服、易于透过血脑屏障、安全等优点。1在二甲基亚砜中略溶，在水中微溶，在冰醋酸中微溶，在甲醇中极微溶解，在乙醇中几乎不溶解。[1]
1原料药微粉化后，静电作用增大，采用筛分法容易糊筛，难操作，效率低，不利于产品粒度的测定。因此，本研究旨在通过建立一种全新的，能准确、快速地测定微粉化1粒度的光散射法光散射法湿法测定法。
1 仪器与试药
Malvern Mastersizer 2000型激光粒度分析仪，HYDRO2000MU 型湿法进样器（英国 Malvern 公司）
1（Lunarsun，含量 98%-102%）；山梨糖醇酐三油酸酯（司盘85）为化学纯，正己烷、无水乙醇为分析纯。
2 方法与结果
微粉化后的替莫唑胺，颗粒极细，非常容易产生静电，故采用光散射法濕法测定法。
2.1 方法的确定
2.1.1筛选分散剂
根据1的溶解度，初步选定乙醇为分散剂。实验过程中发现乙醇会逐步溶解1。溶剂的极性会影响药物的溶解度，故根据溶剂的极性大小选定正已烷为分散剂。
将1加入正己烷中，超声，样品粘于烧杯壁底及壁上，且成团块状。因此判定需在正己烷中加入表面活性剂防止粒子聚集。吐温80不能改善样品粘壁。0.1%和0.2%的司盘85—正己烷作为分散剂分散效果无明显差异，最后选定0.1%的司盘85--己烷作为分散剂。
2.1.2设定仪器参数
在用激光粒度仪进行粒度测定时需设定的主要仪器参数有分散介质折射率、样品折射率、样品吸收率。分散介质的折射率可通过文献查得，己烷的折射率为1.372。1的折射率为1.520。样品的吸收率为0.1。[2]
搅拌器转速设定为2000rpm，循环时间设定为2分钟。
2.1.3筛选样品浓度
样品浓度需满足仪器灵敏度要求并使粒子保持单个原始态。湿法测定所需的供试品量通常应达到检测器遮光度范围的8 ～ 20%。[3]
10mg，20mg，30mg，和40mg1，用10ml0.1%的司盘85--己烷分散，超声30秒后检测。样品浓度过小，仪器遮光率达不到8%的要求，样品浓度过大，则仪器遮光度超过20%，仪器提示加入更多的分散剂。最后确定30mg 样品分散到10ml0.1% 司盘85-正己烷为合适的样品浓度
2.1.4溶液稳定性研究
样品配制好后，超声30秒，室温放置5分钟，观察到样品重新粘在烧杯底部及壁上，振摇后样品不能重新分散。配制好的样品，超声30秒后，立即进样，溶液循环测定20分钟，粒度结果变化不明显。所以配制好的样品应立即进样，样品可在系统中稳定循环20分钟。
2.1.5确定的方法
称取1.0+/-0.05克span-85，用正己烷稀释到1000ml（01%）做分散剂。取微粉化的替莫唑胺30mg，放入一盛有10ml分散剂的50ml烧杯中，超声30秒钟。往Hydro SM进样器（小杯进样器）中加入100ml分散剂，搅拌下用滴管将供试液转移入进样器中。循环速度2000rpm，循环2分钟。
2.1.6分析方法验证
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证。[3]根据粒度测定方法的特点，验证了方法的精密度和耐用性。
（1）精密度。精密度通常包括重复性和中间精密度。
（2）重复性。实验员A按照2.1.5章节描述的方法配制六份样品并进行测定。6个样品的d（0.5）RSD应小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD应小于15%。结果见表1。 结论：6个样品的d（0.1），d（0.5），d（0.9）的RSD均小于5%，符合验证标准。
（3）中间精密度。实验员B隔天按照2.1.5章节描述的方法配制六份样品并进行测定。实验员A和B共12个样品的d（0.5）RSD应小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD应小于15%。结果见表2。
结论：12个样品的d（0.5）RSD小于5%，d（0.1）、d（0.9）的RSD小于10%。符合验证标准。产品粒度分布稳定，方法精密度好。
（4）耐用性。影响光散射法测定的实验条件有：样品超声时间，搅拌器转速，样品循环时间。验证时每次只能改变一个条件。验证标准为：改变条件和正常条件下测定结果的d（05）RSD应小于10%，d（0.1）、d（0.9）的RSD应小于15%。各条件下的d（0.1），d（0.5），d（0.9）测定结果见下：
超声：20秒：7.515，18.241，39.406；30秒：7.486，18.190，39.185；60秒：6.021，17.005，39.534；RSD（%）：d（0.1）12.2，d（0.5）3.9，d（0.9）0.4。
搅拌器转速：1800 rpm：6.041，17.879，40.803；2000rpm：7486，18.190，39.185；
2500rpm：5.952，17.638，40.575；RSD（%）：d（0.1）13.3，d（0.5）1.5，d（0.9）2.2；
循环时间：1分钟：7.615，18.344，38.530；2分钟：7.593，18.31，38.426；3分钟：7.565，18.267，38.447；RSD（%）：d（0.1）0.3，d（0.5）0.2，d（0.9）0.1；
结论：各验证条件下个样品的d（0.1），d（0.5），d（0.9）RSD符合验证要求。本方法的耐用性好。
3 分析和讨论
采用光散射法湿法测定时，分散剂的种类非常关键，需选择不溶解原料藥的溶剂。溶剂可依据极性药物在非极性溶剂中难溶，非极性药物在极性溶剂中难溶的原理选择。在分散剂中加入良好的表面活性剂有助于达到更好的分散效果，应筛选表面活性剂的浓度以达到更好的分散效果。样品测定时样品配制用分散剂及进样器中的溶剂应保持一致，否则会破坏样品的分散效果，影响测定结果的准确性。样品浓度对测定很关键，以控制仪器遮光度达到8%-20%为宜。超声可使聚集的颗粒分散开，但应观察超声后样品可以放置的合适时间，避免样品放置后重新聚集。
参考文献：
[1]万艳武.替莫唑胺的工艺条件探索与质量控制研究[D].南京：南京大学，2011.
[2]关玉晶，杨波，蒋翠莺.光散射法测定难溶性药物粒度[J].Strait Pharmaceutical Journal，2017，29（7），1-3.
[3]国家药典委员会编.中国药典[S].2015.四部.374-377.
作者简介：米潇（2000-），女，高中生；崔东冬（1973-），男，主要从事药物开发和应用。