【摘 要】
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目的:以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象,探讨二苯乙烯苷(TSG)介导的抗氧化和抗炎作用及其调控机制.方法:30、60和120 μmol/L的二苯乙烯苷预处理4h,然后以1μg/mL的脂多
【机 构】
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空军军医大学基础医学院,陕西西安,710032空军军医大学军事预防医学院军事毒理学与防化医学教研室,陕西省自由基生物学与医学重点实验室,特殊作业环境危害评估与防治教育部重点实验室,陕西西安710032
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目的:以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象,探讨二苯乙烯苷(TSG)介导的抗氧化和抗炎作用及其调控机制.方法:30、60和120 μmol/L的二苯乙烯苷预处理4h,然后以1μg/mL的脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7)12 h,并设置空白对照组、地塞米松(100 nmol/L)阳性对照和Nrf2抑制剂寒鸦子酸(brusato,50μmol/L)干预组,其中地塞米松和brusatol预处理RAW264.7细胞4h.观察光镜下RAW264.7细胞形态学的改变并统计其被激活比例;ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6的水平;通过DCFH-DA和Mito-SOXTM荧光探针染色,流式细胞仪检测细胞内和线粒体内的ROS水平变化;免疫荧光法检测Nrf2的表达水平变化;Western blot检测核内Nrf2蛋白水平变化;Real-time PCR测定Nrf2下游抗氧化酶HO-1、SOD2、SOD1、CAT和GPX-1表达.结果:与空白对照组细胞相比,LPS处理后RAW264.7细胞活化,胞体增大,形成大量伪足,培养基中TNF-α和IL-6增多.二苯乙烯苷可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞激活,降低培养基中TNF-α和IL-6,且效果优于阳性对照药物地塞米松.同时,二苯乙烯苷可促进Nrf2核转位,并促进下游抗氧化酶HO-1、SOD2和CAT表达,减轻细胞内ROS生成.而brusatol可通过阻断Nrf2活性抑制二苯乙烯苷的抗炎作用.结论:二苯乙烯苷可激活Nrf2及其下游抗氧化酶的表达,具有良好的抗炎和抗氧化作用,是一种炎症相关疾病的候选药物.
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