【摘 要】
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将具有犬细小病毒病典型临床症状的病犬肠溶物经SDS-酚裂解法提取总DNA,并以此DNA为模板,通过人工合成的两条20 mer引物进行PCR扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白
【机 构】
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内蒙古大学生物学系,内蒙古,呼和浩特,010021
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将具有犬细小病毒病典型临床症状的病犬肠溶物经SDS-酚裂解法提取总DNA,并以此DNA为模板,通过人工合成的两条20 mer引物进行PCR扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白VP2基因中间1/3区段,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定.试验结果表明:用PCR扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的27份病犬肠溶物样品均获得了预计长度的DNA片段(531 bp),而健康犬的肠溶物样品PCR结果为阴性.该方法的检测灵敏度很高,最高可将提取的总DNA样品稀释106倍,即可以检测到1.37 pg总DNA样品中所含的病毒DNA.由于该方法直接利用病犬肠溶物提取总DNA,检测方法快速、简便,结果可靠,可在24 h内获得满意结果,适于在临床上推广应用.
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