【摘 要】
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目的：探索脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法：采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度，Annexin V-PE/7-AAD 双染色法，筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81871608）；
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目的：探索脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法：采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度，Annexin V-PE/7-AAD 双染色法，筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组；Western blot检测GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1蛋白表达水平；ELISA检测培养上清中IL-1β和TNF-α表达水平；透射电镜和扫描观察巨噬细胞焦亡形态。结果：巨噬细胞的纯度达到90%；500ng/mlLPS 24h+5mMATP 4h为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式；LPS+ATP组的GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组（P＜0.05）；培养上清中的IL-1β和TNF-α的表达量显著高于对照组（P＜0.05）；电镜下可观察明显的焦亡特征。结论：成功建立了LPS和ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞的焦亡模型，为进一步深入探讨免疫细胞焦亡的分子机制提供了稳定的细胞模型。
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