人凝血因子Ⅶ在CHO/DG44细胞中的表达

来源 :四川大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：chairy01

【摘要】

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PCR法扩增FⅦ基因,构建重组表达质粒FⅦ-pOptiVEC,酶切、测序鉴定.脂质体法将FⅦ-pOptiVEC质粒转入CHO/DG44细胞,并用氨甲喋呤(MTX)进行分级加压筛选,获得高表达重组FⅦ蛋白

【作者】

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马登佼陈金武吴传芳

【机构】

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四川大学生命科学学院功能基因组实验室

【出处】

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四川大学学报(自然科学版)

【发表日期】

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2015年03期

【关键词】

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人凝血因子Ⅶ 真核表达 CHO/DG44细胞凝血活性

【基金项目】

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国家自然科学基金项目(31371325)

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PCR法扩增FⅦ基因,构建重组表达质粒FⅦ-pOptiVEC,酶切、测序鉴定.脂质体法将FⅦ-pOptiVEC质粒转入CHO/DG44细胞,并用氨甲喋呤(MTX)进行分级加压筛选,获得高表达重组FⅦ蛋白的阳性细胞克隆.亲和层析法纯化FⅦ,并通过Western-blot检测蛋白表达情况.采用FⅦ促凝活性检测试剂盒(凝固法)检测FⅦ的凝血活性.结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达目的蛋白,MTX加压使其表达量明显升高.促凝活性检测结果证明获得的FⅦ蛋白具有凝血活性.

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