【摘 要】
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为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗
【机 构】
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浙江大学动物科学学院农业部动物病毒学重点实验室,宁波市象山畜牧兽医局,宁波市余姚畜牧兽医局,宁波市畜牧兽医局
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为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法.确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05 μg/mL,待检血清稀释度为1:50,HRP-IgG稀释度为1:2 000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min.经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25.特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应；重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10％.应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0％～90.9％.本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段.
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