【摘 要】
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目的:通过有限稀释法制备抗RecQ单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫Balb/c小鼠,融合免疫小鼠的脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞,有
【机 构】
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贵州医科大学组织工程与干细胞中心,贵州医科大学免疫学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（８１３６０３４９）；贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目［黔省专合字（２００６）５７］；贵州省国际科技合作计划［黔科合外 Ｇ字（２０１１）７０１２］；贵州省应用基础研究计划重大专项子课题［黔科合 Ｊ重大字（２０１５）２００３］；贵州省教育厅青年科技人才成长项目［黔教合 ＫＹ字（２０１８）１７４］
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目的:通过有限稀释法制备抗RecQ单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫Balb/c小鼠,融合免疫小鼠的脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞,有限稀释法筛选杂交瘤细胞,制备mAb;使用间接ELISA法鉴定单克隆抗体亚型、效价,Western-Blot法测定单克隆抗体特异性;将mAb与RecQ解旋酶结合后,观察mAb对RecQ解旋酶活性的阻断作用。结果:获得1株能稳定分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C1,该杂交瘤细胞染色体数目在94～104;1C1分泌的单克隆抗体类型为IgG1型,1C1株所得上清液和腹水中抗体效价分别为1×10-3和1×10-5,该单克隆抗体可特异性结合RecQ,并可抑制RecQ解旋酶的结合DNA活性。结论:成功制备1株抗RecQmAb,效价高、特异性强。
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