了解无荚膜型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株中Hap黏附素编码基因(hap)分布及其序列保守性，筛选并鉴定Hap蛋白优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。
方法采用生物信息学软件分析NTHi菌株hap基因序列保守性并预测其T-B联合抗原表位。采用PCR扩增NTHi临床菌株hap基因5′端156 bp和3′端855 bp片段(hap-5′-156和hap-3′-855)后测序。构建Hap蛋白N端52 aa和C端285 aa片段(Hap-N52和Hap-C285)7个T-B联合抗原表位肽噬菌体展示系统。采用Western blot和ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白(rPⅢ)展示的T-B联合抗原表位肽抗原性和免疫反应性。
结果hap基因产物为NTHi膜表面蛋白。不同NTHi菌株hap基因5′端156 pb和3′端855 bp序列相对保守，中间区变异较大。56株NTHi临床菌株均能检出hap-5′-156和hap-3′-855片段，其核苷酸和氨基酸序列相似性为92.3%～100%。Hap-N52片段中Hap-N5-24以及Hap-C285片段中Hap-C4-27、Hap-C28-47、Hap-C114-129、Hap-C150-173、Hap-C200-227和Hap-C241-267为评分较高且变异较小的预测T-B联合抗原表位。Western blot和ELISA检测结果显示，rPⅢ展示的Hap-C4-27或Hap-C150-173表位肽能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带且96.9%(63/65)和92.3%(60/65)NTHi感染患儿血清标本相应抗体阳性。
结论hap基因在NTHi临床菌株中分布广泛且5′端156 pb和3′端855 bp序列保守。Hap-C4-27和Hap-C150-173为Hap蛋白优势T-B联合抗原表位，可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。