头孢菌素脱乙酰酶的重组表达及固定化

来源 :工业微生物 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xxuhhe

【摘要】

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本文构建了利用印启动子表达头孢菌素脱乙酰酶（CAH）的重组大肠杆菌DH5α-pCAH。重组菌在7L发酵罐（装液量2L）中发酵28h，发酵液OD600达到27，产酶313kU／L发酵液，粗略估算重组蛋白占细胞

【作者】

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王群魏东芝沈亚领陈鑫金雄熊叶凤起

【机构】

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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,浙江永宁药业股份有限公司

【出处】

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工业微生物

【发表日期】

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2014年4期

【关键词】

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头孢菌素脱乙酰酶生物催化固定化重组大肠杆菌 7-ACA CAH biocatalysts immobilized enzyme recombinant

【基金项目】

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上海市重点学科建设项目资助（B505）,国家重点实验室专项资金资助（2060204）.

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本文构建了利用印启动子表达头孢菌素脱乙酰酶（CAH）的重组大肠杆菌DH5α-pCAH。重组菌在7L发酵罐（装液量2L）中发酵28h，发酵液OD600达到27，产酶313kU／L发酵液，粗略估算重组蛋白占细胞总蛋白的70％。发酵生产的重组CAH粗酶液经过硫酸铵分级沉淀分离纯化和超滤除盐浓缩两步操作，纯化倍数为1．44，总酶活回收率56％，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯化后蛋白没有明显杂蛋白条带出现。纯化后的CAH共价结合固定在环氧基载体LX-1000EP（c）上，通过对固定化条件的优化最终得到固定化酶比活443U

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