【摘 要】
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目的应用TaqMan探针实时荧光PCR技术,建立大肠埃希菌的快速定量检测方法。方法根据大肠埃希菌的ydiJ基因,设计引物和探针,并分析其特异性和灵敏性。制备大肠埃希菌的质粒DNA
【机 构】
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苏州大学; 江苏省昆山市疾病预防控制中心;
【基金项目】
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江苏省卫生厅预防医学2012年科研课题资助项目(Y2012049);苏州市饮用水安全与水性疾病监测公共服务平台开放实验室开放课题资助项目(SZPT2012001)
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目的应用TaqMan探针实时荧光PCR技术,建立大肠埃希菌的快速定量检测方法。方法根据大肠埃希菌的ydiJ基因,设计引物和探针,并分析其特异性和灵敏性。制备大肠埃希菌的质粒DNA标准品,优化qPCR反应检测体系,建立标准曲线,并进行方法学评价。结果该方法有很好的特异性,方法线性范围10~1.0×108拷贝/μl(R2:0.990~0.999)、检测限可达到10拷贝/μl和定量下限100拷贝/μl。RT-qPCR和培养计数法所得结果具有直线相关关系,r=0.991,P<0.01。结论 RT-qPCR方法可以快速、准确、定量地检测大肠埃希菌。
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