【摘 要】
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本次试验以藏茴香叶片为试验材料,采用单因子设计和L16(45)正交设计试验相结合的方法,对影响藏茴香ISSR-PCR扩增结果的Taq酶、引物、Mg2+、dNTPs和DNA用量进行优化,并在此基
【机 构】
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青海大学农牧学院,西宁,810016
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本次试验以藏茴香叶片为试验材料,采用单因子设计和L16(45)正交设计试验相结合的方法,对影响藏茴香ISSR-PCR扩增结果的Taq酶、引物、Mg2+、dNTPs和DNA用量进行优化,并在此基础上,筛选出最适的循环次数和退火温度.结果 表明正交试验各因素显著性为Mg2+浓度＞dNTPs浓度＞Taq酶＞DNA用量＞引物浓度.在25 μL的反应体系中,Taq酶1.OU、引物0.6 μmol/L、Mg2+ 1.5 mmol/L、dNTPs 0.20 mmol/L、DNA 40 ng为最佳用量,最佳退火温度为55℃,最佳循环次数为30.用不同的引物和不同的藏茴香种质对优化的ISSR-PCR反应体系进行验证,表明确定的优化体系具有稳定性高、重复性好等特性.该反应体系的建立为藏茴香ISSR标记的开发、种质资源的鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据.
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