【摘 要】
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目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制.方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,
【机 构】
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哈尔滨医科大学病理生理教研室,黑龙江,哈尔滨,150081
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目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制.方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率.将plRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用1h和撤除NGF 5 h后分别用Western blotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(P-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(P-JNK)表达变化.结果:MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡.Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染plRES-SHP-2野生型组P-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组P-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和plRES-GFP组P-ERK表达明显低于plRES-GFP-SHP-2野生型组,NGF去除+SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组;NGF去除+SHP-2抑制剂组P-JNK表达高于NGF去除对照组;plRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,plRES-GFP-SHP-2野生型组低于plRES-GFP空载体组.结论:SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用.
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