【摘 要】
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为制备非洲猪瘟病毒(ASFV) DP96R蛋白单克隆抗体,根据大肠杆菌密码子优化后的DP96R基因序列设计引物,PCR扩增后连接表达载体pET28a-SUMO构建pET-SUMO-DP96R原核表达质粒,将该
【机 构】
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洛阳普泰生物技术有限公司,河南洛阳471000;国家兽用药品工程技术研究中心,河南洛阳471000
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为制备非洲猪瘟病毒(ASFV) DP96R蛋白单克隆抗体,根据大肠杆菌密码子优化后的DP96R基因序列设计引物,PCR扩增后连接表达载体pET28a-SUMO构建pET-SUMO-DP96R原核表达质粒,将该质粒转化大肠杆菌BL21细胞,经IPTG诱导,获得可溶性的DP96R蛋白.通过Western blot鉴定该蛋白可与ASFV阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性.将纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,共制备了14株针对DP96R蛋白的单克隆抗体.单克隆抗体重链亚类分别为IgG1、IgG2a,轻链亚类均为κ.采用DP96R蛋白为抗原的间接ELISA方法检测抗体的效价均不低于1∶2 560 000,14株单克隆抗体均能够特异性识别DP96R蛋白.本试验为进一步研究DP96R蛋白生物学功能及ASFV基因缺失疫苗开发提供了重要的生物材料.
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