【摘 要】
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目的 观察DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响及其对A549细胞中Apaf-1基因表达的影响.方法 不同浓度的5-Aza-CdR处理A54
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤中心,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科,武汉,430030;
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目的 观察DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响及其对A549细胞中Apaf-1基因表达的影响.方法 不同浓度的5-Aza-CdR处理A549细胞后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率;采用流式细胞术检测处理72 h后的细胞周期及凋亡情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察Apaf-1基因及甲基转移酶的mRNA水平;West blot法检测Apaf-1蛋白的表达变化.结果 各浓度的5-Aza-CdR处理A549细胞后,A549细胞的生长均呈抑制状态,有时间和剂量依赖性.而流式细胞仪分析表明,各浓度的5-Aza-CdR作用72 h后,A549细胞的G0/G1期比例增加,S期比例明显减少,细胞凋亡率明显增加.RT-PCR结果显示,5-Aza-CdR处理组中DNA甲基转移酶的mRNA表达明显受抑,而Apaf-1基因的mRNA表达却明显增加.West blot结果显示Apaf-1基因的蛋白表达明显增加,而阴性对照组中未观察到上述变化.结论 5-Aza-CdR可抑制A549细胞的生长,并通过抑制DNA甲基转移酶的表达而使Apaf-1基因在人肺腺癌细胞株A549中重新表达.
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