免疫磁珠捕获法检测志贺菌的模拟研究

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目的评估所制备的志贺菌免疫磁珠特异性富集作用,为建立基于免疫磁珠捕获法的志贺菌检测流程提供技术依据。方法制备志贺菌属细菌(鲍氏志贺菌除外)、非目标菌(大肠埃希菌、产气肠杆菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、弗尼斯弧菌、表皮葡萄球菌)的菌悬液,利用志贺菌特异性多抗免疫磁珠进行捕获,接种平板后进行菌落计数,并计算免疫磁珠的特异性及非特异性吸附效率。设计干扰试验,在含有104 cfu/mL的大肠埃希菌悬液中,加入不同浓度的目标菌,用所制备的磁珠进行捕获,评估免疫磁珠的特异性富集效率。在经3和6 h预增菌的含有已知量目标菌的奶粉模拟标本及未增菌的粪便模拟标本中,分别加入所制备的磁珠进行捕获,评估基于免疫磁珠捕获法的志贺菌检测流程的可行性。结果菌落计数表明,制备的志贺菌免疫磁珠对痢疾志贺菌、福氏志贺菌和宋内志贺菌的捕获效率均超过30%,对6种非目标菌的非特异性吸附效率<3%。干扰试验结果显示,与常规直接平板接种法相比,免疫磁珠捕获法的敏感性提高了约100倍;奶粉和粪便模拟试验的结果显示,免疫磁珠捕获法的最低检测限分别可达101 cfu/25 g和101 cfu/mL,并对标本中目标菌的检出率有一定提高。结论志贺菌免疫磁珠对志贺菌属细菌(鲍氏志贺菌除外)具有一定特异捕获与富集作用,可应用于实验室的日常检测工作。
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