研究组蛋白甲基转移酶PR结构域锌指蛋白9（PR domain zinc finger protein 9，PRDM9）对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cell，PDLSC）成骨向分化的影响。
方法将与PRDM9序列互补的短发夹RNA亚克隆到含有绿荧光蛋白的慢病毒载体中，利用重组慢病毒敲除PDLSC中的PRDM9基因，形成敲除组（简称PRDMsh组），转染空载体sh RNA作为对照组；应用反转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）检测PRDM9基因的敲除效率；通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性测定、茜素红染色和钙离子定量分析检测敲除组PRDM9sh与对照组细胞成骨能力的差异；通过实时定量RT-PCR及蛋白免疫印迹实验检测敲除组PRDM9sh和对照组成骨分化指标骨钙蛋白在mRNA水平及蛋白水平的表达差异；通过裸鼠皮下移植物HE染色比较敲除组PRDM9sh及对照组体内成骨能力，计算新成骨组织面积百分比并进行统计学分析。
结果实时定量RT-PCR结果显示，敲除组PRDM9sh中PRDM9基因的相对表达量（0.460±0.017）显著低于对照组（1.000±0.107）（P<0.05）；成骨诱导5 d后，敲除组PRDM9sh的ALP活性（0.762±0.063）显著低于对照组（1.225±0.058）（P<0.01）；成骨诱导2、3周后，茜素红染色结果显示，与对照组相比敲除组PRDM9sh染色明显变浅；成骨诱导2、3周后，敲除组PRDM9sh钙离子含量[分别为（0.071±0.004）、（0.075±0.001）]较对照组[分别为（0.282±0.006）、（0.485±0.004）]显著降低（P<0.01）；RT-PCR结果显示成骨2周时，敲除组PRDM9sh骨钙蛋白mRNA水平的相对表达量（1.059±0.148）显著低于对照组（2.542±0.190）（P<0.01）；蛋白质印迹法结果显示成骨诱导1、2周时，敲除组PRDM9sh骨钙蛋白的蛋白水平表达明显弱于对照组；裸鼠皮下移植物HE染色及计算新成骨组织面积百分比结果显示敲除组PRDM9sh新成骨组织面积百分比[（3.8±2.41）%]较对照组[（24.54±7.06）%]显著降低（P<0.05）。
结论敲除PRDM9基因可以抑制牙周膜干细胞的体内外成骨分化功能。