论文部分内容阅读
【摘 要】目的：构建莆田市汉族人群妊娠高血压疾病患者及健康对照孕妇的基因组DNA标本库及临床生化资料信息数据库，为临床妊娠高血压疾病的遗传易感性研究及防治提供良好的基础及研究平台。方法：收集妊娠高血压疾病患者153例及健康孕妇168例外周静脉血，设计科学而高效的实验流程，提取基因组DNA，，并对临床生化资料等信息数据进行采集、整理、保存，构建妊娠高血压疾病的基因组DNA及临床综合信息数据库。结果：完成福建莆田地区汉族女性妊娠高血压疾病患者和健康孕妇外周静脉血基因组DNA的提取，并对其临床生化资料信息录入计算机归档管理，可随时调用和查找。结论：福建莆田地区汉族女性妊娠高血压疾病及健康对照基因组DNA标本资源库的初步建立为今后相关的妊娠高血压疾病的研究搭建服务平台。
【关键词】妊娠高血压疾病；DNA标本库；意义
【中图分类号】R246 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）06-3480-02
妊娠高血压疾病是妊娠期特有的疾病。发病率我国9.4%～10.4%，国外7%～12%。本病命名强调生育年龄妇女发生高血压、蛋白症状与妊娠之间的因果关系。[1]。而建立153例妊娠高血压子痫前期组和168例正常妊娠组的基因DNA标本和临床数据等综合信息，对妊娠高血压疾病基础研究和临床研究将具有重要价值，DNA标本库的建立同其他标本一样涉及标本的采集、处理、保存和使用以及相关信息的储存、管理[2]。
1 对象与方法
1.1 研究对象：研究对象：本研究患者均为汉族人。遵循知情同意的原则，选取2012年至2013年福建莆田学院附属医院收治的妊娠高血压疾病子痫前期患者153例（病例组），随机选择同期门诊产检及住院分娩的正常孕妇168例（对照组）作为健康对照，各组年龄、孕周及孕产次比较，差异无统计学意义（P>0.05）。两组均排除原发性高血压、肝肾疾病及其他内外科并发症。
1.2 主要试剂：血液基因组DNA提取试剂盒（北京天根生物科技有限公司）、琼脂糖、DNA green、DNA Maker、无水乙醇等。
1.4 血液标本的收集
取患者和正常组孕妇外周静脉血3mI，1ml酸性枸橼酸葡萄糖ACD抗凝，保存在-20℃冰箱中备用。
1.5 血液DNA的提取
采用天根全血基因组DNA提取试剂盒提取外周静脉血基因组DNA.
1.6 DNA浓度及纯度检测
洗脱后的DNA溶液2.0ul，利用紫外分光光度计测得的OD值和观察紫外吸收峰评价提取DNA的浓度和纯度。
1.7 DNA标本的冻存
对于符合要求的DNA，采用小容量的聚丙烯管分装保存，避免使用时反复冻融使DNA片段变小。做好试管编号和贴标签分装后直接放入-80℃冰箱冻存，并登记数据，录入电脑。
2 结果
2.1血液DNA标本的收集和信息的录入
已完成妊娠高血压疾病子痫组和健康孕妇外周静脉血基因组DNA的提取并冻存。采用Excel 软件，对所收集标本的流行病学及临床资料信息录入计算机归档管理。
2.1.1 录入标本信息，冰箱号、原装号、分装号、标本量、采集日期、冻存日期等。
2.1.2 录入病历信息， 如患者姓名、性别、年龄、籍贯、民族、病例号、临床诊断、主要生化指标、治疗等。
2.1.3标本的应用记录：使用日期、使用编号、使用量、使用人。
2.2如图一，外周血基因组DNA琼脂糖凝胶电泳结果
结果显示外周血基因组DNA条带清晰，无杂带及拖尾现象，说明成功提取DNA，可用于后續的实验。
3 讨论
妊娠高血压疾病是导致胎儿早产、胎死宫内以及胎盘早期剥离、孕产妇和围产儿病死率及死亡率升高的主要原因，病因至今不明，病因主要有4种学说：免疫学说、胎盘或滋养细胞缺血学说、氧化应激学说、遗传学说[3]。妊娠高血压疾病发生的高危因素除受到低龄或高龄初产、营养缺乏、多胎妊娠和曾有原发性高血压、肾炎、糖尿病病史等环境因素影响外，还具有明显的遗传倾向[4]。
妊娠高血压疾病目前没有有效的早期诊断方法，不能做到早期的防治，只能根据患者的临床症状和结合临床生化指标来判断。近年来，随着生物医学研究的深入， 临床医学、生物化学、免疫学、酶学、基因组学和分子生物学等学科技术的高速发展。每一份DNA标本都可视作一个小型的遗传信息平台，经过标准规范的保存并且拥有完整病例信息的标本不仅是现在研究计划的资源保障，而且在未来基础和临床研究中可继续扮演信息资源库的角色[5]。为此，通过收集妊娠高血压疾病患者的外周静脉血，提取血液基因组DNA进行深入研究，有利于临床上早日对妊娠高血压疾病早期做出安全准确的诊断。妊娠高血压疾病基因组DNA标本库，是研究妊娠高血压疾病的基础，可适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等重大科研实验，为科学研究提供研究素材和临床研究提供标本来源。标本信息的记录，可以方便在系统上查询标本的临床详细信息，高效的利用标本资源，使研究人员使用时发现新的诊断标记和新靶点的可能[6]。建立妊娠高血压疾病基因组DNA标本资源库， 为今后相关的妊娠高血压疾病的研究搭建服务平台。因此，充分合理利用标本库的巨大资源优势， 协助深入开展妊娠高血压疾病的基础研究， 对保障母婴健康、降低患病率及孕产妇死亡率具有重要意义。
参考文献
[1] 乐 杰主编. 妊娠期高血压疾病. 妇产科学[M]. 第7版. 北京： 人民卫生出版社， 2012： 92-99.
[2] 杨春，葛莲英，贺海平等.肿瘤血清标本库的建立及意义[J].中国癌症防治杂志，2009，1（4）：307-309.
[3] 林其德.妊娠高血压综合征病因学研究进展与展望[J].中华妇产科杂志，2003，38（8）：471-473.
[4] 郑四维.妊娠高血压疾病的相关因素临床分析[J]. 中国医药指南，2010，8（11）：79-80.
[5] 从宪玲，孙然，王涵，孔祥波，张学文.国内外组织标本库发展的现状及启示[J]. 中国实验诊断学，2010，14（1）：148-150.
[6] 杨宗泽，吴正谷，谭维维等. 肿瘤组织标本库的创建与管理 [ J].华西医学， 2012， 27（5）767-770.
【关键词】妊娠高血压疾病；DNA标本库；意义
【中图分类号】R246 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）06-3480-02
妊娠高血压疾病是妊娠期特有的疾病。发病率我国9.4%～10.4%，国外7%～12%。本病命名强调生育年龄妇女发生高血压、蛋白症状与妊娠之间的因果关系。[1]。而建立153例妊娠高血压子痫前期组和168例正常妊娠组的基因DNA标本和临床数据等综合信息，对妊娠高血压疾病基础研究和临床研究将具有重要价值，DNA标本库的建立同其他标本一样涉及标本的采集、处理、保存和使用以及相关信息的储存、管理[2]。
1 对象与方法
1.1 研究对象：研究对象：本研究患者均为汉族人。遵循知情同意的原则，选取2012年至2013年福建莆田学院附属医院收治的妊娠高血压疾病子痫前期患者153例（病例组），随机选择同期门诊产检及住院分娩的正常孕妇168例（对照组）作为健康对照，各组年龄、孕周及孕产次比较，差异无统计学意义（P>0.05）。两组均排除原发性高血压、肝肾疾病及其他内外科并发症。
1.2 主要试剂：血液基因组DNA提取试剂盒（北京天根生物科技有限公司）、琼脂糖、DNA green、DNA Maker、无水乙醇等。
1.4 血液标本的收集
取患者和正常组孕妇外周静脉血3mI，1ml酸性枸橼酸葡萄糖ACD抗凝，保存在-20℃冰箱中备用。
1.5 血液DNA的提取
采用天根全血基因组DNA提取试剂盒提取外周静脉血基因组DNA.
1.6 DNA浓度及纯度检测
洗脱后的DNA溶液2.0ul，利用紫外分光光度计测得的OD值和观察紫外吸收峰评价提取DNA的浓度和纯度。
1.7 DNA标本的冻存
对于符合要求的DNA，采用小容量的聚丙烯管分装保存，避免使用时反复冻融使DNA片段变小。做好试管编号和贴标签分装后直接放入-80℃冰箱冻存，并登记数据，录入电脑。
2 结果
2.1血液DNA标本的收集和信息的录入
已完成妊娠高血压疾病子痫组和健康孕妇外周静脉血基因组DNA的提取并冻存。采用Excel 软件，对所收集标本的流行病学及临床资料信息录入计算机归档管理。
2.1.1 录入标本信息，冰箱号、原装号、分装号、标本量、采集日期、冻存日期等。
2.1.2 录入病历信息， 如患者姓名、性别、年龄、籍贯、民族、病例号、临床诊断、主要生化指标、治疗等。
2.1.3标本的应用记录：使用日期、使用编号、使用量、使用人。
2.2如图一，外周血基因组DNA琼脂糖凝胶电泳结果
结果显示外周血基因组DNA条带清晰，无杂带及拖尾现象，说明成功提取DNA，可用于后續的实验。
3 讨论
妊娠高血压疾病是导致胎儿早产、胎死宫内以及胎盘早期剥离、孕产妇和围产儿病死率及死亡率升高的主要原因，病因至今不明，病因主要有4种学说：免疫学说、胎盘或滋养细胞缺血学说、氧化应激学说、遗传学说[3]。妊娠高血压疾病发生的高危因素除受到低龄或高龄初产、营养缺乏、多胎妊娠和曾有原发性高血压、肾炎、糖尿病病史等环境因素影响外，还具有明显的遗传倾向[4]。
妊娠高血压疾病目前没有有效的早期诊断方法，不能做到早期的防治，只能根据患者的临床症状和结合临床生化指标来判断。近年来，随着生物医学研究的深入， 临床医学、生物化学、免疫学、酶学、基因组学和分子生物学等学科技术的高速发展。每一份DNA标本都可视作一个小型的遗传信息平台，经过标准规范的保存并且拥有完整病例信息的标本不仅是现在研究计划的资源保障，而且在未来基础和临床研究中可继续扮演信息资源库的角色[5]。为此，通过收集妊娠高血压疾病患者的外周静脉血，提取血液基因组DNA进行深入研究，有利于临床上早日对妊娠高血压疾病早期做出安全准确的诊断。妊娠高血压疾病基因组DNA标本库，是研究妊娠高血压疾病的基础，可适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等重大科研实验，为科学研究提供研究素材和临床研究提供标本来源。标本信息的记录，可以方便在系统上查询标本的临床详细信息，高效的利用标本资源，使研究人员使用时发现新的诊断标记和新靶点的可能[6]。建立妊娠高血压疾病基因组DNA标本资源库， 为今后相关的妊娠高血压疾病的研究搭建服务平台。因此，充分合理利用标本库的巨大资源优势， 协助深入开展妊娠高血压疾病的基础研究， 对保障母婴健康、降低患病率及孕产妇死亡率具有重要意义。
参考文献
[1] 乐 杰主编. 妊娠期高血压疾病. 妇产科学[M]. 第7版. 北京： 人民卫生出版社， 2012： 92-99.
[2] 杨春，葛莲英，贺海平等.肿瘤血清标本库的建立及意义[J].中国癌症防治杂志，2009，1（4）：307-309.
[3] 林其德.妊娠高血压综合征病因学研究进展与展望[J].中华妇产科杂志，2003，38（8）：471-473.
[4] 郑四维.妊娠高血压疾病的相关因素临床分析[J]. 中国医药指南，2010，8（11）：79-80.
[5] 从宪玲，孙然，王涵，孔祥波，张学文.国内外组织标本库发展的现状及启示[J]. 中国实验诊断学，2010，14（1）：148-150.
[6] 杨宗泽，吴正谷，谭维维等. 肿瘤组织标本库的创建与管理 [ J].华西医学， 2012， 27（5）767-770.