【摘 要】
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目的:为深入研究细胞自噬的发生过程及机制,克隆人微管相关蛋白1轻链3-β(microtubule associated protein 1 lightchain 3,MAP1LC3,简称LC3)基因,并构建原核和真核重组质粒
【机 构】
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河南工业大学生物工程学院; 郑州大学附属肿瘤医院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31101931;81172240);河南工业大学博士启动专项基金项目(2010BS016);河南工业大学科技创新人才培育计划项目(11CXRC13)资助
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目的:为深入研究细胞自噬的发生过程及机制,克隆人微管相关蛋白1轻链3-β(microtubule associated protein 1 lightchain 3,MAP1LC3,简称LC3)基因,并构建原核和真核重组质粒用于后续的研究。方法:首先RT-PCR方法从人食管癌9706细胞基因组中克隆LC3基因,并分别连接到pET-32a载体和pEGFP-N3载体上,形成重组质粒。前者用IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达,后者进行细胞转染实验。结果:IPTG诱导原核重组质粒在E.coli内实现表达,pEGFP-N3-LC3转染到A549人肺癌细胞36h和鲤鱼上皮瘤细胞系(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC)后,均检测到明显的绿色荧光信号,且在细胞质和胞核内均有分布。结论:成功构建了人源LC3重组表达载体,为研究高等和低等脊椎动物细胞自噬机制及机理过程提供了很好的研究工具。
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