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目的
评价高效液相色谱法同时检测人血浆异丙酚和瑞芬太尼浓度的效果。
方法选择健康志愿者18名,性别不限,年龄18~45岁,体重52~81 kg,采集静脉血样,采用高效液相色谱法同时检测血浆异丙酚和瑞芬太尼的浓度。以麝香草酚为内标,在血浆样品中加入0.1 mol/L的磷酸二氢钾后用正己烷∶乙酸乙酯(1∶4)萃取,以ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250.0 mm, 5 μm)为色谱柱;以甲醇∶0.02 mol/L NaH2PO4∶乙腈=50∶30∶20为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长:1~7 min用210 nm,7~16 min用266 nm,进样量20 μl。采用最小二乘法进行线性回归分析。取瑞芬太尼低、中、高浓度(1.00、5.00、20.00 ng/ml)和异丙酚低、中、高浓度(0.50、2.00、10.00 μg/ml)的血浆样品,测定回收率、精密度和稳定性。
结果瑞芬太尼的直线回归方程为C=12.853 5Ai/As+0.084 8(R2 =0.999 4),血浆瑞芬太尼的浓度在0.5~40.0 ng/ml内线性关系良好。异丙酚的直线回归方程为C=8.554 3Ai/As+0.029 1(R2 =0.998 6),血浆异丙酚的浓度在0.2~20.0 μg/ml内线性关系良好。两者相对回收率均在85%~115%,绝对回收率大于75%,日内、日间精密度和稳定性RSD均小于5%,符合生物样品测定要求。
结论本实验建立的高效液相色谱法检测灵敏度高、重现性好、快速简便,可用于人血浆异丙酚和瑞芬太尼浓度的同时检测和临床药代动力学研究。